Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), bileşikleri ayırmak ve tanımlamak için kullanılan bir laboratuvar tekniğidir. Bir çözeltideki bileşikleri ayırmak için farklı polaritelere dayanan bir tür kolon kromatografisidir. HPLC standart kolon kromatografisinden farklıdır çünkü solüsyonu kolondan daha hızlı geçirmek için basınç kullanır ve bu nedenle daha hızlı ve bazen daha doğru sonuçlar verir. Amaç, kolondaki bileşikleri ayırmak ve ayrı ayrı çıkmalarını sağlamaktır.
HPLC'nin hızı ve bileşiklerin farklı polaritelerine dayanması nedeniyle, iki bileşik benzer yapı ve polariteler, kromatografi cihazından aynı anda veya hemen hemen aynı şekilde çıkabilir. zaman. Bu coelution olarak bilinir. Coelution, karışımın hangi kısmının hangi noktada ayrıştırıldığını tam olarak belirlemeyi zorlaştırır.
HPLC tipik olarak farklı malzemelerden yapılmış boncuklarla dolu bir cam kolon kullanır. Kolondan zorlanan karışımlar, boncuklara farklı kuvvetlerde bağlanan kimyasallara sahiptir. Polaritedeki benzerliğe bağlı olan bağlanmanın gücü, kimyasalın serbest bırakılmadan önce boncuklara ne kadar süre bağlanacağını belirler. Bazı bileşikler o kadar güçlü bağlanırlar ki, esasen kolondaki boncuklardan asla salınmazlar ve kolondan çıkan çözeltide asla ölçülemezler.
Tipik laboratuvar ayırma teknikleri, bir tahlil veya ayırma yöntemi geliştirmeyi ve ardından bu tahlili, tek tek bileşikleri bir çözeltiden ayırmak için uygulamayı içerir. Ancak bu genellikle prosedürlerden geçmesi gereken birden fazla çözümle sonuçlanır ve bu da karmaşıklıkta üstel bir artışa yol açar. HPLC genellikle bu süreci basitleştirip hızlandırabilse de, bir HPLC cihazı geliştirmenin maliyeti çok büyük olabilir. Bir HPLC cihazı geliştirmek, çok daha verimli olmasına rağmen, bileşikleri ayırmak için diğer tahlilleri geliştirmekten çok daha maliyetlidir. Bu, birçok küçük özel sektöre ait laboratuvar için finansal olarak uygun değildir.
HPLC sadece basit bileşikleri ayırmak için kullanılmaz, aynı zamanda belirli proteinleri bir hücresel karışımdan izole etmek için de kullanılır. Bu durumda kolondaki boncuklar genellikle toplamanız gereken proteine özgü bir antikorla kaplanır. Proteinler antikorları bağlar ve kalan çözelti kolondan geçirilir, ardından proteinler başka bir çözelti kullanılarak serbest bırakılır ve toplanır. Bu, sütunu her zaman izleyecek ve sürecin tam olarak planlandığı gibi çalıştığından emin olacak çok yetenekli bir teknisyen gerektirir.