นักเคมีใช้โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง หรือ HPLC เพื่อแยกส่วนผสมของสารประกอบ โดยทั่วไป วิธีการประกอบด้วยการฉีดตัวอย่างลงในคอลัมน์ที่ผสมกับตัวทำละลายหนึ่งตัวหรือมากกว่า สารประกอบต่างๆ ดูดซับหรือ "เกาะติด" กับคอลัมน์ในองศาที่ต่างกัน และในขณะที่ตัวทำละลายผลักสารประกอบผ่านคอลัมน์ ส่วนประกอบหนึ่งของของผสมจะออกจากคอลัมน์ก่อน เครื่องมือจะตรวจจับสารประกอบเมื่อออกจากคอลัมน์และสร้างโครมาโตแกรมที่ประกอบด้วยกราฟที่มีเวลาคงอยู่บนแกน x และความเข้มของสัญญาณจากเครื่องตรวจจับบนแกน y เมื่อสารประกอบออกจากคอลัมน์ จะทำให้เกิด "พีค" ในโครมาโตแกรม โดยทั่วไป ยิ่งช่วงพีคของโครมาโตแกรมห่างกันและแคบลงเท่าใด ความละเอียดก็จะยิ่งสูงขึ้น นักวิทยาศาสตร์พิจารณาความละเอียด 1.0 หรือสูงกว่าเพื่อแสดงถึงการแยกตัวที่เพียงพอ
วัดความกว้างของพีคสองยอดที่อยู่ติดกันในโครมาโตแกรมโดยสังเกตว่าค่าแกน x อยู่ที่ฐานของแต่ละพีค แกน x แสดงถึงเวลาการคงอยู่ ซึ่งปกติจะวัดเป็นวินาที ดังนั้น หากจุดสูงสุดเริ่มต้นที่ 15.1 วินาทีและสิ้นสุดที่ 18.5 วินาที ความกว้างของจุดนี้คือ (18.5 - 15.1) = 3.4 วินาที
กำหนดเวลาเก็บรักษาโดยสังเกตเวลา เช่น ตำแหน่งบนแกน x ที่สอดคล้องกับตำแหน่งของจุดสูงสุดของยอด โดยปกติ ค่านี้จะอยู่กึ่งกลางระหว่างสองค่าที่ใช้คำนวณความกว้างในขั้นตอนที่ 1 ตัวอย่างที่ให้ไว้ในขั้นตอนที่ 1 จะแสดงค่าสูงสุดที่ประมาณ 16.8 วินาที
คำนวณความละเอียด R ระหว่างสองยอดโดย:
R=\frac{RT_1-RT_2}{0.5(W_1+W_2)}
ที่ไหนRT1 และ RT2 แสดงถึงเวลาเก็บรักษาของยอด 1 และ 2 และ W1 และ W2 แสดงถึงความกว้างของยอดที่ฐาน ต่อจากตัวอย่างจากขั้นตอนที่ 2 และ 3 จุดสูงสุดหนึ่งแสดงเวลาเก็บรักษา 16.8 วินาทีและความกว้าง 3.4 วินาที หากจุดสูงสุดที่สองแสดงเวลาเก็บรักษา 21.4 วินาที โดยมีความกว้าง 3.6 วินาที ความละเอียดจะเป็นดังนี้:
R=\frac{21.4-16.8}{0.5(3.4+3.6)}=1.3
สิ่งที่คุณต้องการ
- HPLC โครมาโตแกรม
- เครื่องคิดเลข