ข้อดีและข้อเสียของ Western Blot

Western blot ซึ่งเป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่ใช้ในการระบุโปรตีนจำเพาะในตัวอย่างที่กำหนด ใช้ความสามารถของเอ็นไซม์หรือแอนติบอดีปฐมภูมิที่ติดฉลากเรืองแสงเพื่อจับกับแอนติเจนจำเพาะของมัน เป็นกระบวนการสามขั้นตอนที่เริ่มต้นด้วยเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส ตามด้วยเยื่อซับและตรวจด้วยแอนติบอดี การตรวจหาโปรตีนอาจเป็นทางตรงหรือทางอ้อม โดยอย่างหลังใช้แอนติบอดีทุติยภูมิที่ติดฉลากกำกับไว้กับปฐมภูมิ แม้ว่าจะได้รับการยอมรับว่าเป็นเทคนิคการวิเคราะห์โปรตีนตามปกติ แต่ western blot ก็มีข้อจำกัดและประโยชน์เช่นกัน

ข้อโต้แย้งที่ใหญ่ที่สุดประการหนึ่งที่สนับสนุน Western blot คือความอ่อนไหว เนื่องจากความสามารถในการตรวจจับโปรตีนเพียง 0.1 นาโนกรัมในตัวอย่าง เทคนิคนี้จึงสามารถทำหน้าที่เป็น เครื่องมือวินิจฉัยเบื้องต้นที่มีประสิทธิภาพ ตรวจจับแม้การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันเพียงเล็กน้อยจากไวรัสหรือแบคทีเรียในผู้ป่วย ตัวอย่าง. Western blot ทางอ้อมสร้างเพิ่มเติมบนความไวนี้จากความสามารถของแอนติบอดีทุติยภูมิในการขยายความเข้มของสัญญาณที่ตรวจพบโดยระบบการถ่ายภาพ ความไวที่มากขึ้นหมายความว่าจำเป็นต้องมีแอนติบอดีน้อยลงสำหรับการทดสอบ ซึ่งช่วยลดต้นทุนในห้องปฏิบัติการได้อย่างมาก

เทคนิค Western blot มีลักษณะเฉพาะของปัจจัยสำคัญสองประการ ขั้นแรก เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสจะคัดแยกตัวอย่างเป็นโปรตีนที่มีขนาด ประจุ และรูปแบบที่แตกต่างกัน กระบวนการนี้เป็นขั้นตอนใหญ่ในการตรวจจับ เนื่องจากแถบที่ก่อตัวในเจลได้ให้เบาะแสเกี่ยวกับขนาดของโปรตีนหรือโพลีเปปไทด์ที่น่าสนใจอยู่แล้ว ความจำเพาะของปฏิกิริยาระหว่างแอนติบอดีกับแอนติเจนเป็นปัจจัยสำคัญอันดับสอง เนื่องจากแอนติบอดีจำเพาะแสดงสัมพรรคภาพสำหรับโปรตีนจำเพาะ กระบวนการจึงสามารถตรวจหาโปรตีนเป้าหมายได้อย่างเลือกสรรแม้ในส่วนผสมของโปรตีนที่แตกต่างกัน 300,000 ชนิด

แม้ว่าจะมีความไวและความจำเพาะ แต่ Western blot ยังสามารถให้ผลลัพธ์ที่ผิดพลาดได้ ผลลัพธ์ที่เป็นเท็จเมื่อแอนติบอดีทำปฏิกิริยากับโปรตีนที่ไม่ตั้งใจซึ่งเป็นสิ่งที่มักจะ เกิดขึ้นเมื่อผู้ป่วยได้รับการตรวจหาเชื้อเอชไอวีเป็นวัณโรคหรือปรสิตจำนวนหนึ่ง การติดเชื้อ ในทางกลับกัน ค่าลบเท็จสามารถส่งผลได้อย่างง่ายดายหากโปรตีนขนาดใหญ่ไม่ได้รับเวลาเพียงพอในการถ่ายโอนไปยังเมมเบรนอย่างเหมาะสม การซับและการประมวลผลที่ไม่เหมาะสมมักทำให้เกิดแถบบิดเบี้ยว ซีดจาง หรือแม้กระทั่งหลายแถบ ทำให้ผลการทดสอบขึ้นอยู่กับการตีความของช่างเทคนิค

ค่าใช้จ่ายของ Western blot เป็นค่าใช้จ่ายส่วนบุคคลจำนวนมากสำหรับแอนติบอดีที่ติดแท็ก นักวิเคราะห์ที่มีทักษะ และอุปกรณ์ห้องปฏิบัติการ กระบวนการที่ละเอียดอ่อน การซับแบบตะวันตกต้องการความแม่นยำในทุกขั้นตอนเพื่อระบุส่วนประกอบของตัวอย่างอย่างเหมาะสม ข้อผิดพลาดเล็กน้อยในด้านความเข้มข้นของรีเอเจนต์หรือในระยะฟักตัวอาจเป็นหายนะสำหรับกระบวนการทั้งหมด สุดท้าย อุปกรณ์ที่จำเป็นสำหรับการตรวจจับและการถ่ายภาพ เช่น ระบบตรวจจับเคมีเรืองแสง ฟลูออเรสเซนต์ กัมมันตภาพรังสี หรือเลเซอร์ อาจมีราคาแพงเกินไปสำหรับหน่วยจุลชีววิทยาทั่วไป