TA การโคลนนิ่งคืออะไร?

การโคลน TA เป็นวิธีการที่ง่ายและสะดวกสำหรับการทำปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสย่อย (PCR) "TA" ย่อมาจาก "thymine" และ "adenine" เทคนิคการโคลนนี้ใช้ความสามารถของไทมีนในการผสมพันธุ์กับอะดีนีนต่อหน้าไลกาส ไม่ใช้เอ็นไซม์จำกัด ซึ่งแตกต่างจากวิธีการย่อยแบบเดิม แต่ผลิตภัณฑ์ PCR จะถูกขยายโดยใช้เอนไซม์ Taq polymerase

วิธีการโคลน TA ใช้กิจกรรมเทอร์มินอลทรานส์เฟอเรสของกรดดีออกซีไรโบนิวคลีอิกที่แขวนอยู่ที่ปลายแต่ละด้านของผลิตภัณฑ์ PCR

เวกเตอร์การโคลนนิ่งเชิงเส้นที่มีส่วนยื่นของไพรม์-T (3'-T) เดี่ยวและสามอันที่เรียกว่า T-vector ใช้เพื่อโคลนผลิตภัณฑ์ PCR นี้ให้เป็นพลาสมิดเวกเตอร์ ผลิตภัณฑ์ PCR ผสมกับเวกเตอร์นี้ในสัดส่วนที่สูง

DNA ligase (T4 ligase) ถูกเติมลงในส่วนผสม ซึ่งช่วยให้ผลิตภัณฑ์ทั้งสองสามารถผสมพันธุ์และเชื่อมต่อกันได้

การโคลน TA เป็นวิธีที่สะดวกของการโคลนย่อยผลิตภัณฑ์ PCR ในเวกเตอร์เชิงเส้น และง่ายกว่าและเร็วกว่าวิธีการย่อยแบบเดิมมาก เนื่องจากวิธีนี้ไม่ได้ใช้เอ็นไซม์จำกัด ผลิตภัณฑ์ที่ไม่มีไซต์เอ็นไซม์จำกัดจึงสามารถโคลนได้

ข้อเสียคือชุดโคลน TA มีราคาแพงมาก ดังนั้นจึงมีข้อจำกัดในการใช้งาน นอกจากนี้ยังไม่มีการโคลนทิศทาง ดังนั้นความน่าจะเป็นของการโคลนในทิศทางตรงกันข้ามจึงมากกว่า

ผู้ผลิตหลายรายจำหน่ายชุดโคลน TA บางชนิด ได้แก่ Invitrogen, QIAGEN และ Premier Biosoft