การทดสอบ Western Blot คืออะไร?

การทดสอบ Western blot หรือที่เรียกว่า immunoblotting เป็นการทดสอบโปรตีนเฉพาะภายในส่วนผสมของโปรตีน การทดสอบ Western blot ดำเนินการหลังจากเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสหรือการทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) และใช้แอนติบอดีเพื่อระบุโปรตีนจำเพาะ

Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) เป็นการทดสอบทั่วไปที่ใช้ในการแยกโปรตีนเพื่อใช้ใน Western blot โปรตีนจะถูกแยกจากกันด้วยน้ำหนักและคุณสมบัติทางไฟฟ้าขณะที่พวกมันเคลื่อนที่ผ่านเมทริกซ์เจล

การทดสอบ ELISA ใช้เอนไซม์หรือแอนติบอดีที่ยึดติดกับพื้นผิวแข็งเพื่อสร้างพื้นผิวทดสอบ จากนั้นจึงเพิ่มตัวอย่างลงบนพื้นผิวทดสอบ แอนติบอดีหรือเอนไซม์ที่ทำปฏิกิริยาหรือยึดติดกับโปรตีนบ่งชี้ว่าเป็นผลบวก

การทดสอบ Western blot ดำเนินการหลังจากเจลอิเล็กโทรโฟเรซิส โปรตีนที่แยกจากกันจะถูกถ่ายโอน (หรือบล็อท) ไปยังเยื่อหุ้มไนโตรเซลลูโลสหรือไนลอน และระบุโดยแอนติบอดีจำเพาะที่ติดแท็กด้วยโปรตีนทุติยภูมิ

การทดสอบ Western blot ใช้เพื่อยืนยันผลบวกจากการทดสอบเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสหรือ ELISA การทดสอบ Western blot สามารถระบุโปรตีนได้เฉพาะเจาะจงมากขึ้นและสามารถแยกแยะผลบวกที่ผิดพลาดได้