ครูของคุณมอบตัวอย่างแบคทีเรียให้คุณ และถามคุณว่า ตัวอย่างนี้มีจุลินทรีย์ที่ใช้งานได้กี่ตัว สิ่งนี้หมายความว่าอย่างไรและคุณจะเข้าใจได้อย่างไร? วิธีหนึ่งคือการหาจำนวน หน่วยสร้างอาณานิคม(ซีเอฟยู).
CFU คืออะไร?
CFU หมายถึงจำนวนโคโลนีแต่ละโคโลนีของจุลินทรีย์ใดๆ ที่เติบโตบนจานอาหาร ค่านี้แสดงจำนวนแบคทีเรียที่สามารถทำซ้ำได้เมื่อสร้างอาณานิคมบนจาน มีสูตร CFU ที่เกี่ยวข้องกับการสุ่มตัวอย่าง
คุณหา CFU ได้อย่างไร?
การนับจำนวนแบคทีเรียในตัวอย่างของเหลวเป็นเรื่องยากมาก มีมากเกินไปและมีขนาดเล็กเกินไป นอกจากนี้ บางคนอาจเสียชีวิตและบางคนยังมีชีวิตอยู่ และผู้ตายไม่ควรนับรวมในจำนวนทั้งหมด คุณสนใจเฉพาะใน ทำงานได้ แบคทีเรียหรือแบคทีเรียที่สามารถทำซ้ำได้ คุณจะทราบได้อย่างไรว่าคุณมีแบคทีเรียกี่ตัว?
ในลักษณะเดียวกับที่คุณสามารถสร้างแบบสำรวจความคิดเห็น 1,000 คน และนำไปใช้กับ 10,000 คน เพื่อดูว่าพวกเขาจะคิดอย่างไรเกี่ยวกับเรื่องใดเรื่องหนึ่ง คุณสามารถลองนำตัวอย่างเดิมของคุณมาเป็นส่วนเล็กๆ เพื่อหาว่ามีแบคทีเรียกี่ตัวใน ส่วนนั้นแล้วคำนวณหาประมาณว่าน่าจะอยู่ในต้นฉบับจำนวนเท่าใด ตัวอย่าง.
ใช้การเจือจางเพื่อค้นหา CFU
ขั้นตอนในการค้นหา CFU ของตัวอย่างที่กำหนดนั้นเกี่ยวข้องกับการเจือจางตัวอย่างนั้นก่อน จากนั้นจึงทำการเจือจางสารเจือจางลงบนจานด้วยตัวกลางการเจริญเติบโตที่ถูกต้อง การเจือจางหลายครั้งมักเป็นความคิดที่ดี เนื่องจากตัวอย่างดั้งเดิมสามารถเข้มข้นได้มาก
หลังจากที่ปล่อยให้แบคทีเรียเติบโตบนจานตามระยะเวลาที่กำหนด แต่ละอาณานิคม จะถูกนับบนจาน หากตัวอย่างมีความเข้มข้นมากเกินไป แทนที่จะเป็นแต่ละอาณานิคม คุณจะเห็นพื้นที่ขนาดใหญ่ปกคลุมด้วยการเติบโตของแบคทีเรียซึ่งเรียกว่า สนามหญ้า. ซึ่งหมายความว่าคุณควรเจือจางตัวอย่างเพิ่มเติมและลองปลูกใหม่อีกครั้งเพื่อที่คุณจะได้มองเห็นแต่ละอาณานิคม
เนื่องจากโคโลนีแต่ละตัวมาจากแบคทีเรียเพียงตัวเดียวที่ทำซ้ำตัวเองหลายครั้ง สิ่งเหล่านี้เท่านั้นที่นับรวมใน CFU
ขั้นตอนการทดลองหา CFU
ตัวอย่างของการใช้การเจือจางในการคำนวณ CFU อาจเป็นดังนี้: อันดับแรก จากตัวอย่างแรกที่ครูของคุณให้คุณ ให้คุณใส่ 1 มล. แล้วใส่จาน วันรุ่งขึ้นคุณจะเห็นว่ามีสนามหญ้าของแบคทีเรีย ซึ่งหมายความว่าคุณไม่สามารถนับจำนวน CFU ได้ ขั้นตอนต่อไปคือการทำให้เจือจาง
ขั้นแรก คุณนำตัวอย่าง 1 มล. และเจือจางลงในตัวกลางที่เป็นของเหลว 9 มล. เนื่องจากการเจือจางเป็นตัวอย่างหนึ่งส่วนถึงตัวเจือจางเก้าส่วน จึงเรียกว่าการเจือจาง 1:10 จากนั้น ให้คุณนำการเจือจาง 1:10 มา 1 มล. และเพิ่มลงในสื่อของเหลว 9 มล. การเจือจางนี้เป็นการเจือจาง 1:100 สุดท้าย คุณทำการเจือจาง 1:1,000 โดยใช้การเจือจาง 1:100 1 มล. และเติมตัวกลางที่เป็นของเหลว 9 มล. สำหรับการเจือจางแต่ละครั้ง ตอนนี้คุณมีแบคทีเรียเจือจาง 10 มล.
เจือจางเสร็จแล้ว คุณใส่ 0.5 มล. ของการเจือจางลงบนจาน ตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ติดฉลากเพลตที่มีการชุบการเจือจาง
วันรุ่งขึ้นคุณกลับมาและเห็นว่าแผ่นเปลือกโลกทั้งหมดมีอาณานิคมอยู่บ้าง คุณต้องการเลือกจานระหว่าง 30 และ 300 อาณานิคม. คุณเห็นว่าเพลตเจือจาง 1:1,000 มีโคโลนีประมาณ 10 อัน ซึ่งหมายความว่าคุณเจือจางตัวอย่างมากเกินไป เพลตนั้นไม่มีประโยชน์ในการค้นหา CFU
แผ่นเจือจาง 1:10 มีหลายโคโลนี อาจจะมากกว่า 300 ในกรณีนั้นคุณสามารถไปที่เพลท 1:100 คุณนับอาณานิคมบนจานนี้และพบว่ามีอาณานิคม 179 แห่ง ซึ่งหมายความว่า 0.5 มล. ของการเจือจาง 1:100 มี 179 CFU แต่ตัวอย่างเดิมล่ะ?
การคำนวณ CFU คืออะไร?
เมื่อคุณมีข้อมูลแล้ว คุณสามารถคำนวณ CFU ในตัวอย่างเดิมได้
1. ใช้ปริมาณที่คุณชุบ (0.5 มล.) และคูณด้วยปัจจัยการเจือจาง (0.01) เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ 0.005 คุณต้องทำสิ่งนี้เพื่อค้นหาปัจจัยการเจือจางซึ่งทำให้เกิดการนับ CFU ของคุณ ที่นี่ ครึ่งมิลลิลิตรของการเจือจาง 1:100 ช่วยให้คุณนับ CFU ได้
2. แบ่ง CFU ออกจากการเจือจาง (179) ด้วยผลลัพธ์จากขั้นตอนที่ 1 (0.005) เพื่อให้ได้ผลผลิต 35,800 CFU
ซึ่งหมายความว่าตัวอย่างเดิม 1 มล. ที่เจือจางมี 35,800 CFU อีกวิธีหนึ่งคือบอกว่าตัวอย่างเดิมมี 35,800 CFU/มล.
CFU เป็นเครื่องมือที่ยอดเยี่ยมในการค้นหาว่ามีแบคทีเรีย เชื้อรา หรือจุลินทรีย์จำนวนเท่าใดในตัวอย่างที่กำหนด วิธีการชุบที่อธิบายในที่นี้มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับตัวอย่างหรือสิ่งมีชีวิตที่มีความเข้มข้นสูงซึ่งไม่สามารถเติบโตได้ดีในการเพาะเลี้ยงของเหลว