Lyse เป็นคำที่มาจากภาษากรีกและหมายถึง "แยก" หรือ "ระเบิด" อย่างเหมาะสม เกี่ยวข้องกับสิ่งที่เกิดขึ้นกับเซลล์ใน lysis buffer ซึ่งเป็นสารละลายที่แตกออกเพื่อแยกออก เนื้อหา นักวิทยาศาสตร์ใช้ lysis buffers เมื่อแยก DNA หรือโปรตีนออกจากเซลล์เพื่อการวิเคราะห์ โดยเฉพาะในกรณีของแบคทีเรีย ประเภทของบัฟเฟอร์การสลายเซลล์แตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับชนิดของการทดลอง แม้ว่าต่อไปนี้จะเป็นทางเลือกทั่วไปบางประการ
ทีแอล; DR (ยาวเกินไป; ไม่ได้อ่าน)
บัฟเฟอร์ Lysis ช่วยในการทำลายเซลล์ที่เปิดอยู่ เพื่อให้สามารถเข้าถึงหรือลบเนื้อหาได้ ตัวอย่างบางส่วน ได้แก่ เกลือ ผงซักฟอก สารคีเลตและสารยับยั้ง และสารเคมีที่เป็นด่างบางชนิด
บัฟเฟอร์และเกลือ
บัฟเฟอร์ทำให้ pH คงที่ในขณะที่เซลล์แตกตัว Tris-HCL เป็นสารเคมีชนิดหนึ่งที่ใช้กันทั่วไปในการบัฟเฟอร์ที่ pH 8 HEPES เป็นสารเคมีบัฟเฟอร์ทั่วไปอีกชนิดหนึ่งในการทดลองเหล่านี้ เกลือโซเดียมคลอไรด์อาจเพิ่มความแข็งแรงของไอออนิก ความเข้มข้นรวมของตัวถูกละลายนอกเซลล์ จุดสุดท้ายนี้มีความสำคัญเนื่องจากน้ำสามารถแพร่กระจายผ่านเยื่อหุ้มเซลล์จากบริเวณที่มีความเข้มข้นของตัวถูกละลายต่ำไปยังบริเวณที่มีความเข้มข้นของตัวถูกละลายสูง
น้ำยาละลายน้ำ
ผงซักฟอกละลายเยื่อหุ้มเซลล์เพื่อให้เนื้อหาของเซลล์หลุดออกไปได้ โครงสร้างโมเลกุลแบบมีและแบบแอมฟิพาทิก (กล่าวคือ โมเลกุลที่มีปลายด้านหนึ่งที่โต้ตอบกับโมเลกุลของน้ำได้ง่าย ในขณะที่ปลายอีกด้านที่ไม่ชอบน้ำหรือ "กลัวน้ำ" ไม่มี) พวกมันสามารถละลายไขมันโดยสร้างไมเซลล์ ซึ่งเป็นกระจุกเล็กๆ โดยที่ส่วนหางที่ไม่ชอบน้ำของโมเลกุลของผงซักฟอกจะชี้เข้าด้านในไปยังโมเลกุลของไขมัน ผงซักฟอกทั่วไป ได้แก่ โซเดียม โดเดซิล ซัลเฟต หรือ SDS, NP-40 และไทรทันเอ็กซ์
สารคีเลตและสารยับยั้ง
บัฟเฟอร์ไลซิสโดยปกติยังรวมถึงสารคีเลต เช่น กรดเอทิลีนไดเอมีนเตตระอะซิติก (EDTA) หรือกรดเอทิลีนไกลคอลเตตระอะซิติก (EGTA) สารเคมีเหล่านี้จับกับไอออนของโลหะด้วยประจุบวก 2 ประจุ (เช่น แมกนีเซียมและแคลเซียม) จึงไม่สามารถทำปฏิกิริยาอื่นๆ ได้ DNAs จำนวนมาก (โปรตีนที่เคี้ยว DNA) และ Protease (โปรตีนที่เฉือนโปรตีนอื่นๆ) ต้องการแมกนีเซียมไอออนเพื่อ การทำงาน ดังนั้น EDTA และ EGTA จึงช่วยลดระดับโปรตีเอสหรือ DNAse โดยการกีดกันส่วนประกอบสำคัญนี้ กิจกรรม. พวกเขาไม่ได้แยกแยะออกทั้งหมด อย่างไรก็ตาม และโปรตีเอสบางชนิดไม่ได้ขึ้นอยู่กับโคแฟกเตอร์ของแมกนีเซียม ดังนั้น lysis buffers บางครั้งยังรวมถึงสารเคมีที่เรียกว่าสารยับยั้งโปรตีเอสซึ่งจับกับโปรตีเอสและป้องกันไม่ให้ทำงาน อย่างถูกต้อง
การสลายตัวของอัลคาไลน์
การสลายด้วยอัลคาไลน์ ซึ่งเป็นเทคนิคทั่วไปในการทำให้พลาสมิดจากแบคทีเรียบริสุทธิ์ เกี่ยวข้องกับสามวิธี อันแรกประกอบด้วยกลูโคส บัฟเฟอร์ tris-HCL EDTA และ RNAses กลูโคสจะสร้างความเข้มข้นของตัวละลายสูงนอกแบคทีเรีย ดังนั้นพวกมันจึงหย่อนยานเล็กน้อย ซึ่งทำให้สลายได้ง่ายขึ้น ฟังก์ชัน EDTA และ tris-HCL ตามที่อธิบายไว้แล้ว ในขณะที่ RNAse จะเคี้ยว RNA ภายในเซลล์เพื่อกำจัดมันออกไป วิธีแก้ปัญหาที่สองทำให้เซลล์แตกตัว ประกอบด้วยผงซักฟอก SDS และ NaOH ซึ่งเพิ่ม pH เป็น 12 หรือสูงกว่า ทำลายโปรตีนภายในเซลล์และทำให้ DNA แยกออกเป็นเส้นเดียว สารละลายที่สามประกอบด้วยโพแทสเซียมอะซิเตทเพื่อคืนค่า pH ให้อยู่ในระดับที่เป็นกลางมากขึ้นเพื่อให้สายพลาสมิดดีเอ็นเอสามารถกลับมารวมกันได้ ในระหว่างนี้ โปรตีนที่แปลงสภาพจะจับตัวเป็นก้อนและตกตะกอน ในขณะที่ไอออนโดเดซิล-ซัลเฟต ร่วมกับโพแทสเซียมไอออนเพื่อสร้างสารประกอบที่ไม่ละลายน้ำซึ่งตกตะกอนจากสารละลายด้วย