ส่วนประกอบพื้นฐานของ HPLC

โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงเป็นเทคนิคสำหรับการวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการของส่วนผสม เป็นโครมาโตกราฟีที่มีประสิทธิภาพซึ่งใช้ความดันสูง แทนที่จะเป็นเพียงแรงโน้มถ่วง เพื่อขับเคลื่อนตัวอย่างของส่วนผสมผ่านคอลัมน์ ตัวอย่างจะถูกฉีดเข้าไป จากนั้นปั๊มที่มีแรงดันปริมาณสูงจะช่วยเคลื่อนย้ายตัวอย่างไปตามคอลัมน์ที่อัดแน่น โดยแยกตัวอย่างออกเป็นส่วนประกอบแต่ละส่วน การแยกนี้จะถูกวิเคราะห์โดยเครื่องตรวจจับเพื่อให้ได้ผลลัพธ์

เพื่อที่จะฉีดเข้าไปใน HPLC ตัวอย่างต้องละลายในตัวทำละลายของเหลวแบบมีขั้วก่อน อย่างพึงประสงค์หนึ่งที่มีสเปกตรัม HPLC ที่รู้จักเพื่อให้สามารถแยกความแตกต่างจากข้อมูลของตัวอย่างได้ สารละลายของเหลวที่มีตัวอย่างจะถูกวางลงในเครื่องมือและถูกส่งไปยังคอลัมน์ ตำแหน่งที่แท้จริงของบริเวณที่ฉีดขึ้นอยู่กับยี่ห้อของเครื่องมือ ในกรณีส่วนใหญ่ กระบวนการฉีดจะเป็นแบบอัตโนมัติ แต่ในบางกรณี เจ้าหน้าที่ห้องปฏิบัติการต้องฉีดตัวอย่างโดยใช้เข็มฉีดยาขนาดเล็ก

ส่วนประกอบปั๊มของหน่วย HPLC มีความจำเป็น เนื่องจากจะให้แรงดันที่ขับเคลื่อนตัวอย่างผ่านคอลัมน์ ความแรงของปั๊มแตกต่างกันไป แต่ปั๊มที่ทรงพลังสามารถสร้างแรงดันได้สูงถึง 6,000 psi หรือปอนด์ต่อตารางนิ้ว ซึ่งใช้หลังจากฉีดตัวอย่างแล้ว ซึ่งช่วยให้ตัวอย่างผ่านคอลัมน์ได้เร็วและมีประสิทธิภาพมากกว่าการหยดผ่านโดยใช้แรงโน้มถ่วงเพียงอย่างเดียว

ความเร็วที่เพิ่มขึ้นของตัวอย่างที่ผ่านคอลัมน์โดยปั๊มช่วยให้สามารถใช้คอลัมน์ประเภทที่แตกต่างจากที่ใช้ในโครมาโตกราฟีของเหลวอย่างง่าย วัสดุบรรจุภัณฑ์ในคอลัมน์อาจมีขนาดอนุภาคเล็กกว่ามาก ซึ่งจะเป็นการเพิ่มพื้นที่ผิวและดังนั้นจึงช่วยให้เกิดปฏิกิริยาระหว่างตัวอย่างกับคอลัมน์ คอลัมน์ HPLC ส่วนใหญ่ทำงานผ่านขั้ว ตัวอย่างถูกละลายในตัวทำละลายที่มีขั้ว และคอลัมน์ประกอบด้วยไฮโดรคาร์บอนที่ไม่มีขั้วเป็นส่วนใหญ่ ส่วนขั้วของโมเลกุลตัวอย่างทะลุผ่านคอลัมน์อย่างรวดเร็วเพราะพวกมันมีปฏิสัมพันธ์กับ .เป็นหลัก ตัวทำละลาย ในขณะที่ส่วนประกอบที่ไม่มีขั้วของตัวอย่างยังคงอยู่ในคอลัมน์ ทำให้เกิดปฏิกิริยาที่อ่อนแอกับคอลัมน์ ส่วนประกอบ ดังนั้น ส่วนประกอบของตัวอย่างจะหลุดออกจากคอลัมน์โดยเรียงลำดับจากขั้วส่วนใหญ่ไปหาไม่มีขั้วส่วนใหญ่

ตัวตรวจจับยังแตกต่างกันไปตามประเภทของเครื่องมือ HPLC ที่ใช้ อย่างไรก็ตาม ส่วนใหญ่ทำงานในลักษณะพื้นฐานเดียวกัน แหล่งกำเนิดแสงอัลตราไวโอเลตส่องไปที่ส่วนประกอบตัวอย่างที่แยกจากกันเมื่อออกมาจากคอลัมน์ สารประกอบอินทรีย์ส่วนใหญ่จะดูดซับแสงจำนวนหนึ่ง ดังนั้นในขณะที่พวกมันผ่านลำแสงที่ส่องเข้ามา เครื่องตรวจจับสามารถรับแสงที่ดูดกลืนเข้าไปได้มากเพียงใด ตัวตรวจจับยังบันทึกเวลาเก็บรักษาของส่วนประกอบตามลำดับที่หลุดออกจากคอลัมน์ ผลลัพธ์นี้สามารถวิเคราะห์ตามพื้นที่สูงสุดเพื่อกำหนดลักษณะที่แน่นอนของส่วนประกอบของตัวอย่าง