เอนไซม์มีโครงสร้างสามมิติที่กำหนดไว้ การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างนี้ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในการทำงานของเอนไซม์ pH ของส่วนผสมของปฏิกิริยาจะปรับเปลี่ยนโครงสร้างนี้และด้วยเหตุนี้กิจกรรม เอนไซม์ทุกตัวมีค่า pH ที่เหมาะสมซึ่งจะแสดงกิจกรรมสูงสุด ความแตกต่างที่มีนัยสำคัญจากค่า pH นี้ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างสามมิติของเอนไซม์ที่ลดการทำงานของเอนไซม์ เอนไซม์ Catechol oxidase มีค่า pH ที่เหมาะสมประมาณ 7
เกี่ยวกับ Catechol Oxidase
Catechol ถูกออกซิไดซ์โดย catechol oxidase ในที่ที่มีออกซิเจนเพื่อสร้างเบนโซควิโนนซึ่งเมื่อสัมผัสกับอากาศจะสร้างเมลานิน เอนไซม์นี้ยังเป็นที่รู้จักในชื่ออื่นๆ เช่น ไทโรซิเนส ไดฟีนอลออกซิเดส และโพลีฟีนอลออกซิเดส มันฝรั่ง แอปเปิ้ล และกล้วยมีสาร catechol oxidase ซึ่งทำหน้าที่เกี่ยวกับ catechol ที่ไม่มีสีและแปลงเป็นเมลานินสีน้ำตาล การเกิดสีน้ำตาลขึ้นเมื่อคุณตัดและเปิดเผยสิ่งของเหล่านี้สู่อากาศเป็นผลมาจากปฏิกิริยานี้
การสกัดสาร Catechol Oxidase
Catechol oxidase อาจสกัดได้จากกล้วยหรือมันฝรั่ง บดกล้วยด้วยน้ำปริมาณสองเท่าในครกและสาก หรือผสมกล้วยกับน้ำเพื่อให้ได้สารสกัด catechol oxidase กรองด้วยเนยมัสลินและเก็บในตู้เย็น หากคุณใช้มันฝรั่ง ให้ปอกเปลือกและหั่นเป็นชิ้น จากนั้นปั่นด้วยความเร็วสูงโดยใช้น้ำกลั่นเย็น 700 มล. กรองน้ำมันฝรั่งนี้ผ่านผ้าขาวและแช่เย็น
รายละเอียดการทดลอง
เตรียมสารละลายบัฟเฟอร์ที่มีค่า pH 2, 4, 6, 7 และ 8 ติดฉลากหลอดทดลองห้าหลอดด้วยค่า pH เหล่านี้ เติมแต่ละหลอดให้มีความจุหนึ่งในสี่ด้วยบัฟเฟอร์ตามลำดับ เติมสารสกัด catechol oxidase 10 หยดในแต่ละหลอด ตามด้วย catechol 10 หยด เขย่าหลอดและจดสีของแต่ละหลอดในระดับตั้งแต่ 0 ถึง 5 โดยที่ 0 หมายถึงไม่มีสี และ 5 หมายถึงมีสีน้ำตาลเข้ม เขย่าหลอดต่อไปและสังเกตสีทุก ๆ ห้านาทีเป็นเวลา 20 นาทีถัดไป
การตีความผลลัพธ์
ใช้ข้อมูลที่คุณได้รับสำหรับการอ่าน 20 นาทีเพื่อพล็อตกราฟ บนแกน X ระบุ pH ของบัฟเฟอร์ บนแกน Y ระบุความเข้มของสีตั้งแต่ 0 ถึง 5 สำหรับค่า pH ทุกค่า ให้ทำเครื่องหมายความเข้มของสีและรวมเครื่องหมายเหล่านี้เพื่อให้ได้กราฟสุดท้าย หาจุดพีคของพล็อตนี้และระบุค่า pH ที่เหมาะสมที่สุดสำหรับปฏิกิริยา catechol oxidase หากคุณได้ทำการทดสอบอย่างถูกต้องแล้ว ค่า pH ที่เหมาะสมจะเป็น 7 ที่ pH 7 เอนไซม์จะออกฤทธิ์มากที่สุดและเร่งปฏิกิริยาออกซิเดชันของ catechol อย่างรวดเร็วเพื่อให้มีสีน้ำตาลเข้ม
ข้อควรระวัง
กล้วยและมันฝรั่งมีคาเทชอล ดังนั้นจึงมีความเป็นไปได้ที่บางส่วนจะถูกออกซิไดซ์ระหว่างปฏิกิริยา ซึ่งส่งผลต่อความเข้มของสีที่คุณสังเกตเห็น เพื่อป้องกันปฏิกิริยานี้ ให้เก็บสารสกัด catechol oxidase ไว้บนก้อนน้ำแข็งก่อนที่คุณจะเติมลงในแต่ละหลอด Catechol เป็นพิษ ดังนั้นอย่าปล่อยให้มันสัมผัสกับผิวหนังของคุณ อย่าปิเปตสารละลาย catechol และหากมีการหกเลอะเทอะ ให้สวมถุงมือเพื่อทำความสะอาดโดยใช้กระดาษชำระ