Hur man läser gelelektrofores

Gelelektrofores är en metod som används i laboratorier för att separera DNA (deoxiribonukleinsyra). Det kan också användas för att separera RNA och proteiner.

Att läsa gelelektroforesresultat gör det möjligt för forskare att bestämma storleken på trådarna i ett prov. För att förstå hur processen fungerar måste man först lära sig definitionen av gelelektrofores.

Gelelektrofores är ett kraftfullt verktyg som används i molekylärbiologi för att bestämma storleken och den elektriska laddningen av DNA, RNA och proteiner. Du börjar med att använda bitar av DNA som smälts av enzymer från en större DNA-sträng.

Med gelelektroforesbandintensitet som dina resultat kan du ta reda på vilken storlek fragmenten har. Man kan då få en DNA-fingeravtryck.

Som "elektro" -delen av ordet avslöjar, a gelelektrofores definition innebär användning av ett elektriskt fält. En speciell maskin används som innehåller en buffertlösning som täcker elektroderna, en brunn som gelen kan hänga inuti och elektroderna själva.

Gelelektrofores kräver användning av en gel formad till en platta som typiskt är gjord av en renad version av agar från tång kallad agaros.

Agarosgeler skapa en porös matris genom vilken laddade molekyler i olika storlekar kan färdas i olika hastigheter. En kemikalie som kallas etidiumbromid (EtBr) tillsätts till gelösningen innan den hälls i en form.

Om du har mycket små DNA- eller proteinmolekyler att separera, kan du behöva använda en polyakrylamidgel istället för agaros. Var försiktig när du använder polyakrylamid, för det är neurotoxiskt.

En speciell kam placeras i agarosgelformen och avlägsnas sedan försiktigt efter att den stelnat. Det är här DNA-fragmentet eller andra molekylära prover placeras, efter att de först blandats med ett speciellt laddningsfärgämne. De lastfärg är bara för att spåra DNA-rörelsen, eftersom det annars inte syns.

Det finns också en brunn som innehåller vad som kallas a DNA-stege eller markör. Detta fungerar som en mall av hög kvalitet med kända bandstorlekar för storleksjämförelse med de DNA-prover som studeras. När det elektriska fältet har applicerats kommer dessa negativt laddade molekyler att färdas genom gelén mot den positiva änden.

När molekylerna har rest till slutet av gelén är det dags för läsning gelelektroforesresultat. EtBr-färgämnet i gelén binder lätt till DNA, därav dess användning, och då kan du se DNA-band fluorescera under UV-ljus.

Du måste vara mycket försiktig så att du inte rör vid etidiumbromid, för dess tillhörighet till DNA betyder också att den kan varva ner den; det anses därför vara ett mutagen. Nyare, säkrare färgämnen finns nu, även om deras prispoäng är högre.

UV-ljuset avslöjar gelelektroforesbandintensiteten hos DNA eller andra molekylära prover. Placeringen av banden på en gel avslöjar storleken på DNA-fragment. De gelelektroforesbandintensitet avslöjar molekylens koncentration.

Nu kan du jämföra DNA-band i dina prover med DNA-stegprovet. De kända bandstorlekarna på stegen hjälper dig att bestämma den relativa storleken på det DNA du studerar.

Gelelektrofores har använts i DNA-fingeravtryck och kriminalteknik. Det har hjälpt forskare att bestämma information om genomerna hos många arter. Användning av högkvalitativa gelelektroforesresultat är viktigt för dessa viktiga områden.

Det är därför viktigt att arbeta med högkvalitativa ingredienser och vara mycket försiktig med att göra geler. Det är viktigt att förhindra kontaminering av DNA-prover med RNA eller proteiner.

Se till att du använder ren buffert, häll gelén försiktigt så att kammbrunnarna är jämnt formade och håll alla reagenser vid rätt temperatur. Gelelektrofores bandintensiteten bör vara levande och ren, utan spår av annat DNA i bakgrunden, och inga utstryk av RNA eller proteiner som förorenar gelén.