Gelelektrofores är en metod som används i laboratorier för att mäta och sortera DNA-strängar. Det är nödvändigt eftersom DNA under normala förhållanden är för litet för att kunna manipuleras, även om det visas med de flesta mikroskop. Gelelektroforeslaboratoriet använder ett relativt enkelt förfarande, och samma grundläggande teknik kan också användas för att separera enskilda proteiner.
Gelmatrisen
För att starta gelelektroforesproceduren måste du först skapa gelén. Vanligtvis tillverkas geler i tunna ark med ett ämne som kallas agaros. Pulveriserad agaros placeras i en kolv, följt av en saltvattenlösning som kallas buffert. Denna blandning av agaros och buffert upphettas tills de två substanserna smälter ihop och hälls sedan i en formform. En anordning som kallas en kam placeras sedan i ena änden av formen innan gelen svalnar. När gelén kyls bort avlägsnas kammen och lämnar små spår som kommer att användas för att hålla DNA-prover.
En speciell egenskap hos den kylda agarosblandningen (kallad gelmatris) härrör från det faktum att den skapas med saltvatten. När den är elektrifierad blir matrisen ledande och låter el strömma längs dess längd. En annan speciell egenskap hos gelmatrisen är närvaron av vanliga, mikroskopiska hål. Dessa hål gör det möjligt för DNA-strängar att röra sig genom gelmatrisen och underlätta sorteringsprocessen.
Elektroforeskammaren
Nästa steg är att skapa en elektroforeskammare. Detta är en liten rektangulär låda, kopplad med en positiv och negativ elektrisk anslutning i båda ändarna. Kamrarna är vanligtvis grunda, tillräckligt små för att passa på en bordsskiva och byggda av klara material som plexiglas.
Saltvattenlösning hälls i botten av elektroforeskammaren och gelmatrisen nedsänks något i denna lösning. Saltvattnet tjänar två syften: att hjälpa flödet av el och hålla gelmatrisen fuktig. Eftersom DNA drivs av en negativ laddning, placera din matris så att dina prover kommer att ligga bredvid din negativa elektriska anslutning.
Förbereda DNA
DNA-prover framställs sedan. Eftersom DNA i lösning är nästan omöjligt att se, läggs ett färgämne som kallas en laddningsbuffert till varje enskilt prov. Detta medel förtjockar också DNA-lösningen, vilket gör den mindre rinnande och mer användbar. Använd en pipett för att överföra ett prov av DNA-lösning till varje alternerande slits i gelmatrisen. I den tomma luckan mellan varje prov, placera någon lösning av DNA vars längd du redan känner (kallad DNA-standard) för experimentkontroll och jämförelse.
Slå på strömmen
Sätt nu på elektroforeskammaren. Under negativ kraft tvingas dina DNA-prover över kammarens längd. Små DNA-strängar kommer att röra sig snabbare genom gelmatrisen och på kort tid separerar de sig från längre, långsammare strängar. Färgämnet i färgämnet låter dig följa DNA-spåret. Du kommer inte att kunna se enskilda DNA-strängar, men strängar av samma längd kommer att klumpas ihop.
Sista stegen
När DNA: n sorteras ut, avlägsnas matrisen från elektroforeskammaren. DNA färgas sedan för att möjliggöra enklare mätning och undersökning.