Vad är uppräkning i mikrobiologi?

Mikrobiologi är studien av mikroorganismer: mikroskopiska eller knappt synliga encelliga livsformer som bakterier, archaea, protozoans och vissa svampar, och även några extremt små flercelliga växter, djur och svampar. Mikrobiologer studerar också verklighetstrogna icke-organiska fenomen som virus, prioner, viroider och virioner. "Microbe" är en samlingsbegrepp för alla dessa enheter. Uppräkning i mikrobiologi är bestämningen av antalet enskilda livskraftiga mikrober i ett prov; fyra grundläggande tekniker är möjliga.

Ett direkt mått för mikrobiell räkning är standardplattantalet, även kallat en livskraftig räkning. För denna räkning odlar du ett prov genom att späda ut det, placera det på plattor av odlingsmedium och inkubera dem under en viss tid. Du räknar sedan antalet kolonier och använder detta nummer för att härleda det ursprungliga antalet mikrober i provet. Tekniskt sett ger ett plattantal inte antalet enskilda mikrober utan "kolonibildande" enheter, "för du kan inte veta säkert om varje koloni faktiskt kom från en enda mikrob eller från en liten grupp mikrober. Dessa räkningar anses dock vara mycket exakta för att uppskatta antalet mikrober i originalprover. Nackdelarna är att detta test är tidskrävande och kräver mycket specialutrustning som måste förberedas korrekt.

Direkta mikroskopiska räkningar, även kallade totala cellantal, är en annan form av direkt räkning. Först delar du upp ett prov i ett antal lika stora kamrar. Sedan bestämmer du det genomsnittliga antalet mikrober per kammare genom att räkna några eller alla under ett mikroskop. Slutligen använder du detta genomsnitt för att beräkna antalet i den ursprungliga enheten. Den största nackdelen med direkta mikroskopiska räkningar är att det är svårt att skilja levande mikrober från döda, så den här metoden kanske inte ger en exakt livskraftig uppräkning.

Grumlighetstest är former av indirekt uppräkning. Grumlighet är grumligheten hos en vätska. I turbidimetrisk mätning lägger du ett prov i lösning, mäter den nya lösningens grumlighet genom att skina ljus genom den med en spektrofotometer, uppskatta sedan antalet levande mikrober som krävs för att producera den observerade grumhetsnivån. Nackdelen här är att någon måste ha gjort många standardplatträkningar av mikroben i fråga för att göra provlösningar med olika grumlighet, så att du har en standard för att mäta ditt nuvarande prov mot. Du måste också vara uppmärksam på att alltför koncentrera ditt prov, för ett turbidimetriskt antal är bara korrekt om inga mikrober i provet blockerar andra. I en jämförelse av visuell grumlighet jämför du grumligheten i ditt prov med grumligheten för en enhet av samma storlek och känt mikrobiellt antal, och uppskattar en uppräkning baserat på denna jämförelse.

Två andra former av indirekt uppräkning är massbestämning och mikrobiell aktivitetsmätning. För en massbestämning räknar du upp mängden biologisk materia i ditt prov, jämför detta vikt till en standardkurva för kända mikrobiella räkningar och uppskatta det ursprungliga mikrobiella antalet utifrån detta jämförelse. För en mätning av mikrobiell aktivitet mäter du mängden av en biologisk produkt i ditt prov, t.ex. metaboliskt avfall, jämför sedan detta med en standardkurva för kända räkningar och uppskatta din uppräkning från detta jämförelse.