Flytande näringsbuljong används för att odla bakterier som Escherichia coli. Recept för denna buljong varierar beroende på bakteriearten och närvaron av genetiska modifieringar, t.ex. antibiotikaresistens. Buljongen kan stelna genom att tillsätta agar, vilket gör det möjligt för bakterierna att bilda distinkta kolonier, medan de i flytande kultur helt enkelt sprids genom hela volymen. Detta är en grundläggande men väsentlig teknik för avancerade metoder såsom genkloning eller mikrobiologiska analyser. Denna artikel antar att standardlaboratorium Escherichia coli-stammar ska odlas på Luria buljong (LB) agarplattor (eller petriskålar).
Väg ut 10 gram trypton av bakteriekvalitet, 5 gram jästextrakt, 5 gram natriumklorid, 15 gram agar eller agaros och 1 ml 1N natriumhydroxid. Blanda dessa med en volym destillerat och autoklaverat sterilt vatten tills 1 liter medium erhålls. Autoklaver media i löst täckta flaskor eller kolvar i 25 minuter. Låt svalna till cirka 50 grader innan du tillsätter reagens som kommer att förstöras vid hög värme, såsom antibiotika eller andra näringstillskott.
Låt det autoklaverade mediet svalna till 50 grader Celsius och inte lägre än 45 grader Celsius, eftersom agaren sätts i sin behållare innan den kan hällas. Skaffa sterila petriskålar och häll tillräckligt för att täcka hela ytan på plattan och minst hälften av dess djup. Undvik överfyllning av plattorna och låt helst inte agaren komma i kontakt med skålens överkant. Låt plattorna stelna i en steril miljö (t.ex. under en laminär flödeskåpa) genom att lämna locken av och till ett hörn av huven.
Torka plattorna. Även om plattorna kan användas så snart de har härdat, kommer viss fukt att finnas på ytan av agaren, vilket förhindrar att bakteriekolonier häftar tillräckligt. Därför är det bäst att torka plattorna innan du applicerar bakterier, till exempel genom att låta dem sitta ute på rumstemperatur under några dagar eller i en halvtimme under en laminär flödeskåpa eller i en 37 graders Celsius inkubator.
Förvara tallrikarna. Torkade tallrikar bör staplas upp och ned (inverterade) på locken och återföras till originalet förpackningar, tejpade och antingen förpackade i folie för att skydda mot ljus eller på lämpligt sätt behållare. Skriv alltid beredningsdatumet på plattorna och undvik att använda om tallrikarna är mer än 2 månader gamla.
Referenser
- "Aktuella protokoll i molekylärbiologi"; Karen Elbing och Roger Brent; 2002
Tips
- Utför så många av ovanstående steg (helst alla) som möjligt inom en steril miljö (t.ex. under en öppen eld eller en laminär flödeskåpa) för att förhindra att luftburna bakteriella föroreningar tränger in i och växer i media.
Om författaren
Palmer Owyoung har en magisterexamen i internationell verksamhet från University of California i San Diego och en Kandidatexamen i sociologi från University of California i Santa Barbara och är utbildad molekylär biolog. Han har varit frilansskribent sedan 2006. Förutom att skriva är han heltidsförhandlare och internetmarknadsförare.
Fotokrediter
Jupiterimages / Comstock / Getty Images