Din lärare ger dig ett prov av bakterier och frågar dig: Hur många livskraftiga mikroorganismer finns i detta prov? Vad betyder detta och hur räknar du ut det? En metod är att hitta antalet kolonibildande enheter(CFU).
Vad är CFU?
CFU hänvisar till antalet enskilda kolonier av mikroorganismer som växer på en skylt medie. Detta värde representerar i sin tur antalet bakterier som kan replikeras när de har bildat kolonier på plattan. Det finns en CFU-formel som innefattar provtagning.
Hur hittar du CFU?
Att räkna antalet bakterier i ett flytande prov är mycket svårt. Det finns för många av dem och de är för små. Dessutom kan vissa av dem vara döda och andra levande, och de döda bör inte räknas med i summan. Du är bara intresserad av genomförbar, livskraftig bakterier eller bakterier som kan replikera. Så hur kan du räkna ut hur många bakterier du har?
På samma sätt som du kan ta en enkät på 1000 personer och använda den på 10 000 personer för att ta reda på hur de kan tänka på ett visst ämne. Du kan försöka ta en liten del av ditt ursprungliga prov, ta reda på hur många bakterier det finns i den delen, och räkna sedan ut för att uppskatta hur många det kan ha varit i originalet prov.
Använda utspädningar för att hitta CFU
Förfarandet för att hitta CFU för ett visst prov innebär att man först spänner ut provet. Utspädningarna pläteras sedan på plattor med rätt tillväxtmedium. Flera utspädningar är ofta en bra idé eftersom originalprovet kan vara mycket koncentrerat.
Efter att ha låtit bakterierna växa på plattorna under en viss tid, enskilda kolonier räknas på en tallrik. Om provet var för koncentrerat kommer du istället för enskilda kolonier att se ett stort område täckt med bakterietillväxt som kallas a gräsmatta. Detta innebär att du bör späda ut ditt prov ytterligare och försöka växa igen så att du kan se enskilda kolonier.
Eftersom enskilda kolonier kommer från en enda bakterie som replikerade sig många gånger så räknas bara dessa mot CFU.
Experimentellt förfarande för att hitta CFU
Ett exempel på att använda utspädningar för att göra en CFU-beräkning kan gå enligt följande: Först, från det första provet som din lärare ger dig tar du 1 ml och pläterar den. Nästa dag ser du att det finns en gräsmatta av bakterier. Det betyder att du inte kan räkna antalet CFU. Nästa steg är att göra några utspädningar.
Först tar du 1 ml prov och späd ut det i 9 ml flytande media. Eftersom utspädningen är ett delprov till nio delar utspädningsmedel, kallas det en 1:10 utspädning. Sedan tar du 1 ml av utspädningen 1:10 och tillsätter den till 9 ml flytande media. Denna utspädning är en 1: 100 utspädning. Slutligen gör du en 1: 1 000 spädning genom att ta 1 ml av 1: 100-spädningen och tillsätta 9 ml flytande media. För varje utspädning har du nu 10 ml utspädd bakteriekultur.
Utspädningar gjort, du pläterar 0,5 ml av utspädningarna på plattorna. Se till att märka plattorna med vilken utspädning pläterats.
Nästa dag kommer du tillbaka och ser att alla tallrikar har några enskilda kolonier. Du vill välja en tallrik mellan 30 och 300 kolonier. Du ser att 1: 1 000 utspädningsplattan har cirka 10 kolonier så det betyder att du överspädd provet. Den plattan kommer inte att vara till hjälp för att hitta CFU.
1:10 utspädningsplattan har många kolonier, kanske mer än 300. I så fall kan du gå till plattan 1: 100. Du räknar kolonierna på denna tallrik och upptäcker att den har 179 kolonier. Detta innebär att 0,5 ml av utspädningen 1: 100 innehåller 179 CFU. Men hur är det med originalprovet?
Vad är CFU-beräkning?
Nu när du har lite data kan du göra CFU-beräkningen i originalprovet.
1. Ta mängden du pläterade (0,5 ml) och multiplicera med utspädningsfaktorn (0,01) för att ge 0,005. Du måste göra detta för att hitta utspädningsfaktorn som gav ditt CFU-antal. Här tillät en halv milliliter av utspädningen 1: 100 dig att räkna CFU.
2. Dela CFU från utspädningen (179) med resultatet från steg 1 (0,005) för att ge 35 800 CFU.
Detta innebär att den ursprungliga 1 ml provet som späddes innehåller 35 800 CFU. Ett annat sätt att uttrycka detta är att säga att originalprovet har 35 800 CFU / ml.
CFU är ett utmärkt verktyg för att hitta hur många bakterier, svampar eller mikroorganismer som finns i ett givet prov. Pläteringsmetoden som beskrivs här är särskilt användbar för mycket koncentrerade prover eller organismer som inte växer bra i flytande odling.