Ett av de klassiska sätten att bestämma koncentrationen av mikrober i ett prov är att späda ut provet, odla mikroberna på plattor och räkna kolonierna. De pläterade mikroberna växer från en kolonibildande enhet bestående av en eller flera celler till en synlig koloni som kan ses och räknas. Bakterier är den vanligaste mikroben för att bedöma med hjälp av plattantal. Kolonital används för att upptäcka och räkna mikrober i jord, vatten och mat. Protokoll för att räkna kolonier betonar ett noggrant och metodiskt tillvägagångssätt.
Utspädningsprover, plätering och inkubation
Om du helt enkelt suddar ut ett mikrobprov på en agarplatta ser du så många kolonibildande enheter att de enskilda kolonierna kommer att smälta samman, vilket gör dem omöjliga att räkna. För att lösa detta problem, blanda provet i ett flytande medium, ta en liten mängd av blandningen och späd den ytterligare. Upprepa denna process sex till tio gånger. Sprid den slutliga utspädningen på en agarplatta och inkubera den i fyra till sju dagar innan du räknar kolonierna.
Manuell räkning
Det primära tricket i att räkna kolonier är att räkna varje kolonipunkt en gång. Ett tillvägagångssätt är att sätta petriskålen på en rutnätbakgrund och räkna kolonierna i varje rutnätcell, och röra sig i ett metodiskt mönster genom alla cellerna. Att markera räknade kolonier på baksidan av petriskålen kan också vara ett bra tillvägagångssätt. Generellt måste du räkna minst tre plattor; använd bara plattor som innehåller 30 till 300 kolonier för att göra robusta slutsatser, föreslår Microbiology Network, ett företag som tillhandahåller konsulttjänster till laboratorier och tillverkare. Plattor med kolonier som är för många för att räknas eller med för få kolonier behöver pläteras från en ny utspädning.
Automatiserad räkning
Mänskliga fel ökar tiden för att räkna kolonier manuellt. För att förbättra både noggrannhet och effektivitet placerar du petriskålen i en automatiserad koloniräknarenhet. Automatiserade kolonidiskar tar en bild av skålen, separerar kolonierna från bakgrunden och använder sedan en algoritm för att räkna kolonierna på tallriken. Algoritmerna kan ha svårigheter att skilja kolonier när två eller flera kolonier rör vid kanterna, så det här är ett område med pågående mjukvaruutveckling.
Gör räkningen mer komplicerad
Noggrannheten för beräkning av mikrobdensitet från koloniräkningar har vissa begränsningar. Kolonibildande enheter kan vara en enda cell, en kedja av celler eller en hel cellklump. Antagandet är att en koloni representerar en cell, så koncentrationer beräknade från koloniräkningar kan vara låga. Olika mikrober behöver olika tillväxtförhållanden, och kolonierna på plattan representerar bara de mikrober som trivs på det tillväxtmediet under dessa inkubationsförhållanden. Dessutom registrerar inte koloniräkning döda celler, ett viktigt övervägande när du behöver koncentrationen av celler i det ursprungliga provet.