Högpresterande vätskekromatografi (HPLC) är en laboratorieteknik som används för att separera och identifiera föreningar. Det är en typ av kolonnkromatografi som är beroende av olika polariteter av föreningar i en lösning för att separera dem. HPLC skiljer sig från standardkolonnkromatografi eftersom det använder tryck för att tvinga lösningen genom kolonnen snabbare och därför ger snabbare och ibland mer exakta resultat. Målet är att separera föreningar i kolumnen och få dem att lämna separat.
På grund av hastigheten för HPLC och beroende av olika polariteter av föreningar, två föreningar med liknande struktur och polariteter kan lämna kromatografiapparaten samtidigt eller nästan samma tid. Detta kallas coelution. Coelution gör det svårt att bestämma exakt vilken del av blandningen som eluerades vid vilken tidpunkt.
HPLC använder vanligtvis en glaskolonn fylld med pärlor gjorda av olika material. Blandningarna som tvingas genom kolonnen har kemikalier som binder med olika styrkor till pärlorna. Bindningens styrka, som beror på likheten i polaritet, avgör hur länge kemikalien kommer att binda till pärlan innan den släpps. Vissa föreningar binder så starkt att de i huvudsak aldrig frigörs från pärlorna i kolonnen och mäts aldrig i lösningen som kommer ut från kolonnen.
Typiska laboratorieseparationstekniker involverar utveckling av en analys eller separationsmetod och implementering av analysen för att separera enskilda föreningar från en lösning. Detta resulterar dock vanligtvis i flera lösningar som också måste genomgå procedurer, vilket leder till en exponentiell ökning av komplexiteten. Även om HPLC ofta kan förenkla och påskynda denna process kan kostnaden för att utveckla en HPLC-apparat bli enorm. Att utveckla en HPLC-apparat, även om den är mycket effektivare, är mycket dyrare än att utveckla andra analyser för separering av föreningar. Detta gör det inte ekonomiskt lönsamt för många små privatägda laboratorier.
HPLC används inte bara för att separera enkla föreningar, utan används också för att isolera specifika proteiner ur en cellulär blandning. I detta fall täcks vanligtvis pärlorna i kolonnen med en antikropp som är specifik för det protein du behöver samla in. Proteinerna binder antikropparna och den återstående lösningen passerar genom kolonnen, sedan frigörs proteinerna med en annan lösning och samlas in. Detta kräver att en mycket skicklig tekniker övervakar kolumnen hela tiden och ser till att processen körs exakt som planerat.
