Како протумачити Агаросе гел

Једном када узорке ДНК анализирате на агарозном гелу и направите слику, можете је сачувати за касније, у том тренутку можете анализирати резултате и протумачити их. Врсте ствари које тражите зависиће од природе вашег експеримента. На пример, ако радите отиске прстију ДНК, желећете да упоредите величину делова ДНК из два узорка - можда од осумњиченог и од места злочина. Ако радите са плазмидима бактерија, за разлику од тога, можда ћете морати да се уверите да плазмид садржи уметак. Због тога ће начин на који тумачите свој гел делом зависити од експеримента који сте урадили. Ипак, постоје нека општа правила која можете применити.

Имајте на уму да ћете можда морати или не требати користити упутства у овом одељку. Електрофореза у агарозном гелу се често користи да би се потврдило да плазмид садржи дати уложак. Ако не радите са плазмидима, можете прескочити овај одељак. Ако јесте, међутим, можете следити ова упутства.

Приметите да ако радите са несеченим или урезаним плазмидима, не можете да процените величину помоћу поступка из горњег одељка 1. То је зато што нерезани и зарезани плазмиди мигрирају различитом брзином од линеарне ДНК.

Упоредите број опсега у свакој траци. Подсетимо да рестрикциони ензим сече ДНК на местима на којима се јавља дата секвенца која се назива рестрикционо место. Ако је узорак третиран са ДВА рестрикциона ензима, требало би да постоје трака за уметак и трака за остатак плазмида. То је зато што ће уметак бити окружен са два рестрикциона места, свако за различити ензим, па ће усеци на обе ове локације ослободити уметак из плазмида. Пресек на само једном месту, за разлику од тога, претвориће плазмид у линеарну ДНК. Изрезани узорак без рестрикционих ензима или једног рестрикционог ензима требало би да садржи једну траку, док узорак исечен са два рестриктивна ензима треба да има две траке.

Пазите на траке створене одрезаном плазмидном ДНК. Зарезани плазмид има рез само у једној нити, тако да мигрира спорије од пресеченог плазмида. Исечени плазмиди заузврат мигрирају спорије од нерезане ДНК.

Процените величину уметка користећи поступак описан у одељку 1 и утврдите да ли одговара вашим очекивањима (која ће се разликовати у зависности од експеримента).

Ствари које ће вам требати

  • Оловка
  • Папир
  • Програм прорачунских табела
  • Слика вашег гела
  • Лењир
  • Објави
instagram viewer