Течна хранљива јуха користи се за узгајање бактерија као што је Есцхерицхиа цоли. Рецепти за ову јуху варирају у зависности од врсте бактерија и присуства генетских модификација, нпр. Резистенције на антибиотике. Чорба се може очврснути додавањем агара, који омогућава бактеријама да формирају различите колоније, док се у течној култури једноставно распрше по целој запремини. Ово је основна, али суштинска техника за напредне методе попут клонирања гена или микробиолошких испитивања. Овај чланак претпоставља да ће стандардни лабораторијски сојеви Есцхерицхиа цоли бити култивисани на агарским плочама од бујона Луриа (ЛБ) (или петријевим здјелицама).
Измерите 10 грама триптона бактеријског степена, 5 грама екстракта квасца, 5 грама натријум хлорида, 15 грама агара или агарозе и 1 милилитар 1Н натријум хидроксида. Мешајте их са запремином дестиловане и аутоклавиране стерилне воде док се не добије 1 литар медија. Аутоклавирајте медијум у боцама или боцама у затвореном стању 25 минута. Оставите да се охлади на приближно 50 степени Целзијуса пре додавања реагенаса који ће бити уништени при високој врућини, попут антибиотика или других хранљивих додатака.
Оставите да се аутоклавирани медиј охлади на 50 степени Целзијуса и не нижи од 45 степени Целзијуса, јер ће се агар створити у својој посуди пре него што се може сипати. Набавите стерилне петријевке и сипајте толико да покрије целу површину плоче и најмање половину њене дубине. Избегавајте прекомерно пуњење плоча и по могућности не дозволите да агар додирује горњу ивицу посуде. Оставите да се плоче стврдну у стерилном окружењу (нпр. Испод ламинарне напе) остављајући поклопце искључене и до угла хаубе.
Осушите плоче. Иако се плоче могу користити чим се поставе, на површини агара биће присутно мало влаге, што ће спречити да се колоније бактерија довољно прилепе. Због тога је најбоље сушити плоче пре наношења било каквих бактерија, на пример остављајући их да седе собне температуре неколико дана или пола сата под ламинарним хладњаком или на 37 степени Целзијуса инкубатор.
Спремите тањире. Осушене плоче треба сложити наопако (обрнуто) на поклопце и вратити у првобитне вредности амбалажу, залепљену траком и умотану у фолију ради заштите од светлости или у одговарајућу контејнер. Увек напишите датум припреме на плочама и избегавајте употребу ако су плоче старе више од 2 месеца.
Референце
- „Актуелни протоколи у молекуларној биологији“; Карен Елбинг и Рогер Брент; 2002
Савети
- Извршите што више горе наведених корака (пожељно све) у стерилном окружењу (нпр. Под отворени пламен или поклопац са ламинарним протоком) да спрече улазак и раст бактеријских загађивача у ваздуху у медија.
О аутору
Палмер Овиоунг је магистар међународног пословања на Калифорнијском универзитету у Сан Диегу и Дипломирани уметник социологије са Калифорнијског универзитета у Санта Барбари и школовани је молекулар биолог. Слободни је писац од 2006. године. Поред писања, редовни је Форек трговац и Интернет продавац.
Пхото Цредитс
Јупитеримагес / Цомстоцк / Гетти Имагес