Трис или трис (хидроксиметил) аминометан је уобичајени биолошки пуфер који се користи током процеса екстракције ДНК. Током екстракције из било ког броја извора, ДНК је осетљива на пХ. Током лизе ћелија, уклањања нежељених ћелијских компонената и таложења, трис се користи за одржавање стабилног пХ. Поред тога, игра посебно важну улогу у лизи ћелија.
ТЛ; ДР (предуго; Нисам прочитао)
Екстракција ДНК је процес осетљив на пХ, а коришћење трис пуфера помаже у одржавању пХ стабилним током лизе и екстракције ћелија.
Трис као бафер
Како пХ може да утиче и на њега утичу бројни ћелијски фактори, одржавање стабилног пХ је неопходно за експерименталну науку. Биолошки пуфери, попут триса, су важни јер могу одржавати стабилан пХ упркос утицајима који би у супротном могли променити пХ. Трис (хидроксиметил) аминометан, са пКа 8,1, ефикасан је пуфер између пХ 7 и 9. Због свог неутралног опсега, трис је уобичајени пуфер у биолошким лабораторијама. Међутим, трис пуфер је осетљив на температуру и треба га користити на температури на којој је првобитно пХ био пХ да би се избегла нетачност.
Лисис оф Целлс
Лиза или отварање ћелија је први корак екстракције ДНК. То се постиже пуфером који садржи трис и ЕДТА (етилендиаминетеросирћетна киселина). ЕДТА везује двовалентне катионе као што су калцијум и магнезијум. Будући да ови јони помажу у одржавању интегритета ћелијске мембране, њихово уклањање ЕДТА дестабилизује мембрану. Трис је главна компонента пуфера; његова главна улога је одржавање пХ пуфера на стабилној тачки, обично 8,0. Поред тога, трис вероватно ступа у интеракцију са ЛПС (липополисахаридом) у мембрани, служећи за дестабилизацију мембране даље.
Трис штити ДНК од промене пХ вредности
Када се ћелије раздвоје, њихова ДНК и садржај се просипају у пуфер. Поред тога, често су укључени РНаза А (уништава РНК), протеазе (уништава протеине) и СДС (натријум додецил сулфат, солубилизује фрагменте мембране). Заједно узев, ова супа са ћелијским садржајем и фрагментираном РНК и протеинима може имати велики утицај на пХ раствора. Будући да је ДНК осетљива на пХ, важно је да трис пуферира супу и одржава пХ на стабилној тачки.
Преципитација ДНК
У завршној фази екстракције ДНК, сама ДНК се екстрахује из раствора. У овом тренутку, ДНК је растворљива у пуферу. Да би се екстраховала из раствора, ДНК је нерастворљива додавањем етанола или изопропанола (изопропил алкохол). Када се то уради, ДНК у раствору постаје очигледна као бела вештаста супстанца. Иако се ДНК на овај начин може изоловати из преосталих ћелијских компонената, није „употребљива“ када је нерастворљива. Након изолације, алкохол се уклања, а ДНК се мора вратити у биолошки пуфер, попут триса, да би се користио.
Уради сам
Иако се екстракција ДНК обично врши у истраживачким лабораторијама, обично се користи један од многих комерцијално доступни комплети, свако може код куће да изврши екстракцију ДНК користећи уобичајене предмете за домаћинство и зелено грашак или спанаћ. У овом случају, трис, нити било који биолошки пуфер, није присутан да заштити ДНК од померања пХ. Међутим, то је визуелни начин помоћи студентима да се повежу са ћелијском ДНК.