Израчунавање титра за вирус је сложен начин да се каже да научник броји број вируса у одређеном узорку. Да би израчунали титре вируса, научници инфицирају плоче растућих бактерија вирусним растворима у различитим концентрацијама и схватите број вируса у оригиналном раствору бројећи бактерије које су умрле услед вируса инфекција.
Ставите рукавице, напуните 10 епрувета са 9 мл чорбе и обележите их „10 ^ -1“, „10 ^ -2“, „10 ^ -3“ и тако до „10 ^ -10.“ Ове епрувете ће се користити за серијска вирусна разблажења која се користе за израчунавање фага титар. Пошто вируси могу нарасти до невероватно високих концентрација, морате их разблажити како бисте их ефикасно бројали. Свака епрувета представља десетоструко разблажење вируса.
Узмите 1 мл мешане културе из епрувете са ознаком „10 ^ -1“ и пренесите је новом пипетом у следећу епрувету са ознаком „10 ^ -2“. Помешајте и ову епрувету.
Наставите овај образац да бисте креирали серијску серију разблаживања. На крају ћете добити 9 епрувета од 9 мл и 1 тубу од 10 мл. Вирусно оптерећење у вашим цевима ће се разблажити негде од 10 пута (прва цев) или 100 пута (друга цев) до десет милијарди пута (последња епрувета).
Додајте две капи бактеријске културе у свој агар и нежно га измешајте. То су бактерије које ће бити убијене, што вам омогућава да избројите број честица вируса у одређеном раствору.
Додајте 1 мл сваког серијског разблажења у одговарајућу агар цев док су епрувете још увек у купатилу са топлом водом. На пример, 1 мл вашег серијског разблажења од 10 ^ -1 треба да уђе у цев за агар са ознаком „10 ^ -1“.
Помијешајте сваку епрувету, а затим сваку сипајте у Петријеву плочицу са одговарајућом етикетом. Ово ће створити танки слој агара који је инокулиран бактеријама и вирусима у свакој плочи. Пустите да плоче расту преко ноћи у инкубатору.
Извадите тањире из инкубатора и прегледајте их. Требали бисте видети облачна подручја на целој плочи у којима су порасле бактерије, осим малих светлих места која се називају плакови. Ове плочице су мрље мртвих бактерија, а свака плочица представља један вирус.
Узмите број плочица на тањиру и помножите са 10. Да сте избројали 157 плакета, добили бисте 1570.
Помножите број који сте добили у претходном кораку са обрнутим бројем на цеви за разблаживање. На пример, ако је плоча коју сте изабрали плоча 10 ^ -5, помножили бисте 1570 са 10 ^ 5 да бисте добили 157000000. Овај коначни број је ваш титар фага и представља број вируса по мл ваше изворне културе.