Микробиолог користи хитинско бојење како би под микроскопом могла јасно да види гљивице. Гљиве користе хитин као структурни материјал у својим ћелијским зидовима, тако да мрља добро показује ћелијски зид. Лактофенол памучна плава мрља је најчешћа мрља код гљивица. Фенол убија микроорганизме и спречава гљивичне ензиме да разграде ћелију. Боја памучно плаве боје постаје хитин плава. Бојење хитином је релативно једноставан поступак са јефтиним материјалима. Можете сами направити боју или купити комерцијално припремљену мрљу.
Припремите раствор лактофенол памучно плаве боје. Измерите 0,05 грама памучно плаве боје користећи осетљиву вагу. Помешајте боју са 20 милилитара дестиловане воде у епрувети и оставите је преко ноћи.
Ставите рукавице пре него што завршите припрему мрља следећег дана. Ставите 20 мл млечне киселине у чашу и помешајте је са 20 г кристала фенола. Мешајте док се смеша не раствори. Додајте 40 мл глицерола и мешајте. Затим процедите памучно плави раствор кроз комад филтер папира у чашу и темељито промешајте.
Алтернативно, користите комерцијално припремљени извор мрље. Чувати мрљу на собној температури.
Означите стакалце микроскопа идентификационим именом или бројем узорка. Користите једну стерилну капаљку да бисте ставили једну кап воде у средину клизача микроскопа. За сув узорак ставите једну кап 70-одстотног алкохолног раствора на тобоган, а затим помоћу стерилне петље умешајте суви узорак у алкохол.
Помоћу чисте капаљке пренесите две капи лактофенолне памучно плаве мрље на средину клизача. Ако на слајду користите 70 процената алкохола, учините то пре него што алкохол испари са тобогана.
Додирните једну ивицу поклопца микроскопа на једну ивицу влажног препарата за узорке. Нека клизач лагано падне на припрему узорка, осигуравајући да испод клизача не заробите ваздушне мехуриће. Обојени узорак је сада спреман за испитивање под микроскопом.
