Учитељ вам предаје узорак бактерија и пита вас: Колико је одрживих микроорганизама у овом узорку? Шта ово значи и како то схватате? Један метод је проналажење броја јединице за формирање колонија(ЦФУ).
Шта су ЦФУ?
ЦФУ се односи на број појединачних колонија било ког микроорганизма који расту на плочи медија. Ова вредност заузврат представља број бактерија способних за размножавање јер су формирале колоније на плочи. Постоји формула ЦФУ која укључује узорковање.
Како пронаћи ЦФУ?
Бројање броја бактерија у течном узорку је веома тешко. Има их превише, а премали су. Штавише, неки од њих могу бити мртви, а други живи, а мртви не би требало да се рачунају у укупни број. Тебе занима само одржив бактерије или бактерије које се могу реплицирати. Па како можете да схватите колико бактерија имате?
На исти начин на који можете узети анкету од 1.000 људи и применити је на 10.000 људи да бисте схватили како они могу размишљати о одређеној теми. Можете покушати да узмете мали део оригиналног узорка и схватите колико бактерија има тај део, а затим израчунајте да бисте приближно одредили колико их је могло бити у оригиналу узорак.
Коришћење разблажења за проналажење ЦФУ
Поступак за проналажење ЦФУ датог узорка укључује прво разблаживање тог узорка. Затим се разблажења наносе на плоче са одговарајућим средством за раст. Вишеструка разблажења су често добра идеја, јер изворни узорак може бити врло концентрован.
Након што сте дозволили бактеријама да расту на плочама одређено време, поједине колоније броје се на тањиру. Ако је узорак био превише концентрован, уместо појединачних колонија видећете велико подручје прекривено растом бактерија које се назива а травњак. То значи да бисте требали додатно разблажити свој узорак и покушати поново да растете тако да можете да видите појединачне колоније.
Како појединачне колоније потичу од једне бактерије која се много пута реплицирала, само оне се рачунају у ЦФУ.
Експериментални поступак за проналажење ЦФУ
Пример коришћења разблажења за израчун ЦФУ-а могао би ићи на следећи начин: Прво, из почетног узорка који вам даје ваш учитељ, узмете 1 мл и тањирате. Сутрадан видите да постоји травњак бактерија. То значи да не можете рачунати број ЦФУ. Следећи корак је прављење неких разблажења.
Прво узмете 1 мл узорка и разблажите га у 9 мл течног медија. С обзиром на то да је разблаживање један део узорка на девет делова разблаживача, то се назива разблаживањем од 1:10. Затим узмете 1 мл разблажења 1:10 и додате 9 мл течног медија. Ово разблажење је разблажење 1: 100. На крају направите разблажење 1: 1.000 узимајући 1 мЛ разблажења 1: 100 и додајући 9 мЛ течног медија. За свако разблажење сада имате 10 мл разблажене бактеријске културе.
Разређења су готова, на тањире ставите 0,5 мл раствора. Обавезно означите плоче којима је разређено.
Сутрадан се вратите и видите да све плоче имају неке појединачне колоније на себи. Желите да одаберете тањир између 30 и 300 колонија. Видите да плоча за разблаживање 1: 1.000 има око 10 колонија, па то значи да сте претерано разблажили узорак. Та плочица неће бити од помоћи у проналажењу ЦФУ.
Плоча за разблаживање 1:10 има много колонија, можда и више од 300. У том случају можете ићи на тањир 1: 100. Бројиш колоније на овој плочи и откриваш да има 179 колонија. То значи да 0,5 мл разблажења 1: 100 садржи 179 ЦФУ. Али шта је са оригиналним узорком?
Шта је прорачун ЦФУ?
Сада када имате неке податке, можете извршити прорачун ЦФУ у оригиналном узорку.
1. Узмите количину коју сте посадили (0,5 мл) и помножите са фактором разблажења (0,01) да би се добило 0,005. То морате учинити да бисте пронашли фактор разблаживања који је дао ваш ЦФУ број. Овде вам је пола милилитара разблажења 1: 100 омогућило да избројите ЦФУ.
2. Поделите ЦФУ из разблажења (179) са резултатом из корака 1 (0,005) да бисте добили 35,800 ЦФУ.
То значи да оригинални 1 мЛ узорка који је разблажен садржи 35.800 ЦФУ. Други начин да се то каже је рећи да оригинални узорак има 35.800 ЦФУ / мл.
ЦФУ је одличан алат за проналажење броја бактерија, гљивица или било којих микроорганизама у датом узорку. Овде описана метода облагања нарочито је корисна за врло концентрисане узорке или организме који не успевају добро у течној култури.
