Бактерије се узгајају у Петријевим посудама на чврстом медијуму познатом као бактеријски агар, где настају узгајане кружне колоније. За разлику од поједине бактеријске ћелије, колонија је група бактерија која је довољно велика да буде видљива голим оком. Раст бактерија може се мерити једноставним посматрањем колико је колонија присутно; међутим, више квантитативних метода укључује употребу коморе за бројање, или чешће, одрживо бројање плоча. Потоњи се најчешће користи, јер такође пружа квалитативне информације, попут ефекта различитих услова раста. С обзиром да у петријевки може бити милијарде бактерија, прво је потребно мерење разблажити узорак тако да је могуће избројати број колонија.
У епрувету додајте 10 микролитара почетне бактеријске културе у 90 микролитара медија за разблаживање. Чврсто затворите поклопац цеви и лагано вртложите да бисте добили хомогену мешавину. Сада је узорак једна десетина његове првобитне концентрације.
Пребаците 10 микролитара овог новог узорка у нову епрувету која садржи 90 микролитара средства за разблаживање и поново га измешајте. Још једном, резултат ће бити узорак додатно разблажен - сада ће бити стоти део своје првобитне концентрације. Поновите ово неколико пута, док се оригинални узорак не разблажи између 10
4 и 1010 пута. Уверите се да је свака епрувета означена исправним разређивањем, на пример 10-1, 10-2 и тако даље.На плочу агара нанесите 10 микролитара последњег разблажења завршеног. Користећи ивицу за ширење, расподелите раствор бактерија по целој површини плоче агара. Поновите ово за још две плоче. Такође је уобичајено да се ови кораци изводе са другим нивоима разблажења ради поређења. Обавезно означите дно плоча. Вратите поклопце на сваку плочу и оставите да се плоче са агаром суше неколико минута или на лабораторијској клупи испод пламена или у инкубатору. Ставите плоче у инкубатор који треба подесити на температуру одговарајућу за сој бактерија. Оставити да расте 12 до 16 сати.
Колоније би требало да буду видљиве након 16 сати; међутим, неке генетске модификације могу захтевати дуже (на пример, развој боје). Кад су видљиве колоније, извадите плоче и пронађите оне које имају између 30 и 300 колонија. Помоћу трајног маркера ставите тачку на дно петријевке - на страну агара, а не на поклопац - свуда где је кроз агар видљива колонија. Пребројите сваку тачку маркера. Поновите за свако јело.
Да би се измерила количина бактерија у почетној култури за овај експеримент, разблаживање је потребно обрнути у прорачунима, на два места. Прво, када сте узели један микролитер из епрувете да бисте ставили у петријевку, узели сте десетину разблаженог узорка, тако да морате све помножити са 10 да бисте то преокренули. Поред тога, ако је фактор разблажења у епрувети био, на пример, 10-7, тада се број колонија мора помножити са 107 како би се преокренуо ефекат разблаживања. Једноставно уклоните негативни предзнак из експонента у прорачунима. Користите формулу:
[Број избројаних колонија] × 10 × [колико пута се узорак мора помножити да би се дошло до првобитне концентрације: на пример, 105] = Број јединица за формирање колонија (ЦФУ) по милилитру почетне културе. Ово је раст бактерија у вашим петријевцима.
