Постоји много метода за одвајање и идентификовање различитих једињења. Хроматографија је наука која вам омогућава да одвојите компоненте смеше. Тхе Р.ф (понекад неформално написано као „РФ вредност“) је део тога.
Постоји много различитих врста хроматографије. Овде је у фокусу најједноставнија врста хроматографије: хроматографија на папиру или танкослојна хроматографија (ТЛЦ). Обоје користе исти општи поступак, који је описан у наставку.
Шта укључује хроматографија?
Све врсте хроматографије имају а стационарна фаза и а покретна фаза. Стационарна фаза, као што бисте могли да погодите из имена, не помера се. У папирној хроматографији стационарна фаза је сам папир.
Да би се започело раздвајање једињења, супстанца која се анализира наноси се на доњу ивицу папира. Затим се папир ставља у чашу која садржи мобилну фазу, која је растварач. Растварач треба да буде испод места на коме је супстанца за анализу тачкаста. Не би требало да потапа аналит.
Течност се капиларним дејством креће према папиру. Ако аналит или део аналита привлачи покретна фаза, он ће се кретати са њом. Ако има јачу привлачност за стационарну фазу, неће се померити.
Након што се растварач донекле померио у непокретну фазу, добићете хроматограм. Овај хроматограм вам говори нешто о раздвајању различитих компонената у смеши или вам говори о томе коју супстанцу имате. Како?
Одвајање и препознавање компонената помоћу хроматограма
Ако су услови за развијање хроматограма једнаки, тада би се требало променити растојање које одређена супстанца креће. Ова удаљеност се мери са формула фактора задржавања или Р.ф.
Формула ретенционог фактора је:
Ова вредност би требала бити иста за супстанцу када се хроматограм развија на исти начин.
Ово је корисно када имате мешавину супстанци.
На пример, рецимо да имате четири узорка: три су стандарди, а један смеша. Ваш посао је да утврдите које су компоненте у смеши.
Шта су стандарди? Стандарди су чисти узорак супстанце. Ово се може упоредити на хроматограму.
Смеша се може покретати, након чега можете утврдити колико различите компоненте у њој раде.
Рецимо да Стандард # 1 има јак афинитет за воду (мобилна фаза). То значи да ће мобилном фазом путовати по папиру. Стандард # 2, с друге стране, има јак афинитет према папиру. То значи да ће остати у стационарној фази. И на крају, Стандард # 3 има афинитет и према води и према папиру. Предвиђате да ће преместити средњи износ.
Открићете да се растварач помера за 5,7 цм, док се Стандард # 1 помера за 0,5 цм, Стандард # 2 помера за 4,8 цм, а Стандард # 3 за 2,9 цм. Који су Р.ф вредности за сваки стандард?
Сада знате Р.ф вредности за стандарде. Даље, на други папир ставите тачку смеше и пустите да се хроматограм развије стављањем у воду.
Једном уклоњени, открићете да постоје две тачке које се одвајају од почетне тачке коју сте поставили. То вероватно значи да у вашој смеши постоје само две компоненте. Даље, морате схватити којем од стандарда одговарају ове две компоненте. Да бисте то урадили, мерите Р.ф вредности.
Растварач се померио за 4,5 цм. Једна компонента (названа компонента 1) померала се за 2,2 цм, а друга за 3,9 цм (названа компонента 2). Да бисте видели који стандард одговарају ове компоненте, мораћете да користите формулу фактора задржавања да бисте израчунали Рф вредности.
С обзиром на ове Р.ф вредности, вероватно је да компонента 1 одговара стандарду # 3 пошто је Р.ф вредности су врло сличне. Компонента 2 је вероватно Стандард # 2.