Који су недостаци ХПЛЦ-а?

Течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ) је лабораторијска техника која се користи за одвајање и идентификацију једињења. То је врста колонске хроматографије која се ослања на различите поларитете једињења у раствору како би их раздвојила. ХПЛЦ се разликује од стандардне хроматографије на колони јер користи притисак да би раствор брже прогурао кроз колону и стога даје брже, а понекад и тачније резултате. Циљ је раздвојити једињења у колони и омогућити им да излазе засебно.

Због брзине ХПЛЦ и ослањања на различите поларитете једињења, два једињења са слична структура и поларитети могу истовремено изаћи из апарата за хроматографију или готово исти време. Ово је познато као коелуција. Коелуција отежава одређивање тачно који део смеше се елуира у ком тренутку.

ХПЛЦ обично користи стаклену колону испуњену перлицама од различитих материјала. Смеше које се провлаче кроз колону садрже хемикалије које се различитом снагом вежу за перле. Снага везивања, која зависи од сличности у поларитету, одређује колико дуго ће се хемикалија везати за зрно пре него што се ослободи. Нека једињења се везују толико снажно да се у основи никада не ослобађају из зрна у колони и никада се не мере у раствору који излази из колоне.

instagram story viewer

Типичне лабораторијске технике раздвајања укључују развој теста или методе одвајања, а затим примену тог теста за одвајање појединачних једињења од раствора. Међутим, ово обично резултира вишеструким решењима којима такође треба проћи процедуре, што доводи до експоненцијалног повећања сложености. Иако ХПЛЦ често може поједноставити и убрзати овај процес, трошкови развоја ХПЛЦ уређаја могу постати огромни. Развој ХПЛЦ уређаја, иако много ефикаснији, много је скупљи од развоја других тестова за раздвајање једињења. Због тога то није финансијски исплативо за многе мале лабораторије у приватном власништву.

ХПЛЦ се не користи само за одвајање једноставних једињења, већ се користи и за издвајање специфичних протеина из ћелијске смеше. У овом случају су зрнца у колони обично обложена антителом специфичним за протеин који треба да сакупите. Протеини везују антитела и преостали раствор се пропушта кроз колону, а затим се протеини ослобађају помоћу другог раствора и сакупљају. То захтева високо квалификованог техничара да стално надгледа колону и да се увери да поступак тече тачно онако како је планирано.

Teachs.ru
  • Објави
instagram viewer