Kemiki za ločevanje zmesi uporabljajo tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti ali HPLC. Na splošno je metoda vbrizgavanje vzorca v kolono, kjer se meša z enim ali več topili. Različne spojine se v različni stopnji adsorbirajo ali "držijo" na koloni; in ko topilo potisne spojine skozi kolono, bo ena od komponent mešanice najprej izstopila iz kolone. Instrument zazna spojine, ko izstopijo iz kolone, in izdela kromatogram, ki je sestavljen iz diagrama z zadrževalnim časom na osi x in intenzivnostjo signala iz detektorja na osi y. Ko spojine izstopijo iz kolone, na kromatogramu ustvarijo "vrhove". Na splošno je dlje, ko so vrhovi v kromatogramu ožji in ožji, večja je ločljivost. Znanstveniki menijo, da ločljivost 1,0 ali več predstavlja primerno ločitev.
V kromatogramu izmerite širino dveh sosednjih vrhov, tako da zabeležite, kje so vrednosti osi x na dnu vsakega vrha. Os x predstavlja retencijski čas, ki se običajno meri v sekundah. Če se torej vrh začne pri 15,1 sekunde in konča pri 18,5 sekunde, je njegova širina (18,5 - 15,1) = 3,4 sekunde.
Določite retencijske čase tako, da zabeležite čas, tj. Lokacijo na osi x, ki ustreza lokacijam maksimuma vrhov. Ta vrednost je običajno približno na polovici med dvema vrednostma, uporabljenima za izračun širine v 1. koraku. Primer, podan v koraku 1, bi na primer pokazal največ 16,8 sekunde.
Ločljivost R med dvema vrhovima izračunajte tako:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
kjer RT1 in RT2 predstavljajo retencijske čase vrhov 1 in 2 in W1 in W2 predstavljajo širine vrhov, zajetih v njihovih osnovah. Če nadaljujemo primer iz korakov 2 in 3, ima en vrh čas zadrževanja 16,8 sekunde in širino 3,4 sekunde. Če bi imel drugi vrh zadrževalni čas 21,4 sekunde s širino 3,6 sekunde, bi bila ločljivost:
R = \ frac {21,4-16,8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Stvari, ki jih boste potrebovali
- HPLC kromatogram
- Kalkulator