Glavni razlog, da primerek obarvate, preden ga daste pod mikroskop, je, da ga bolje pogledate, vendar barvanje naredi veliko več kot zgolj poudarjanje obrisov celic. Nekateri madeži lahko prodrejo v celične stene in poudarijo celične komponente, kar lahko pomaga znanstvenikom vizualizirati presnovne procese. Madeži pomagajo tudi razlikovati med živimi celicami in mrtvimi. Poleg tega barvanje omogoča znanstvenikom, da preštejejo število celic določene vrste znotraj določene biomase. Obstaja dvajset ali več različnih vrst madežev in vsak ima svoj namen.
TL; DR (predolgo; Nisem prebral)
Glavni namen barvanja je poudarjanje celic in delov celic. Obstaja več kot 20 različnih vrst madežev, vrsta madežev, ki jih uporabljate, pa je odvisna od tega, kaj iščete.
Vrste madežev
Izbira madeža je odvisna od tega, kaj iščete. Vsi madeži niso primerni za žive celice, toda med njimi so bismarckova rjava, toluensko rdeča, nilsko modra in nilska rdeča ter nekateri fluorescentni elementi, ki se uporabljajo za poudarjanje DNA. Nekateri madeži poudarjajo spore, nekateri zaznajo lipide in beljakovine, nekateri pa ob prisotnosti škroba spremenijo barvo. Namen pregleda določa najboljšo vrsto madežev za uporabo. Na primer, zdravnik, ki opravi bris PAP, bi uporabil Eosin Y. To je kislo fluorescenčno barvilo, ki ob stiku z rdečimi krvnimi celicami, citoplazmo in celičnimi membranami postane rdeče. Uporablja se tudi za testiranje krvnega mozga.
V nekaterih primerih lahko preiskovalec uporabi več kot en madež. Na primer, hematoksilin je madež, ki obarva celična jedra modro. Kadar se uporablja skupaj z eozinom, ki druge dele celice obarva rdeče ali rožnato, daje močnejši kontrast in jedra lažje diferencira. Mazke PAP in vzorce krvnega mozga je lažje pregledati, če se ta dva madeža uporabljata skupaj.
Gramov madež: Bolnišnični delavci uporabljajo Gramov madež za prepoznavanje škodljivih bakterij. To je pravzaprav vrsta barvil, ki imajo različne učinke na različne vrste bakterij in dajejo zdravnikom pomembno diagnostično orodje. Gramov madež je tridelni postopek. V prvem je dodana Huckerjeva kristalno vijolična, ki vse bakterije obarva enakomerno vijolično barvo. V naslednji fazi se doda jodov madež, zaradi česar se barva oprijema gram-pozitivnih celic, ki so predvsem stafilokoki in streptokoki. Madež se izpere, tako da imajo gram-pozitivne celice jasno vijolično barvo; nato se uvede tretji madež, Safranin O, da se poveča kontrast med gram negativnimi bakterijami in ostalim materialom na stekelcu.
Postopek obarvanja
Ko pripravite primerek na diapozitiv, ga lahko pritrdite na suho ali mokro, lahko ga razrežete na tanek del ali pa ga namažete. Pri uporabi madeža je običajen postopek mokrega namestitve vzorca, kar pomeni, da na drsnik položimo kapljico vode, vzorec postavimo v vodo in ga pokrijemo s pokrovčkom. Nato madež s kapalko nanesete na vogal drsnika in dovolite, da se s kapilarnim delovanjem potegne proti vzorcu. Pomaga postaviti papirnato brisačo na nasprotno stran drsnika, da pritegne vodo. Ko se madež razširi po celotnem diapozitivu, je primerek pripravljen za pregled.