Izračun titra virusa je zapleten način, da znanstvenik šteje število virusov v določenem vzorcu. Za izračun titrov virusov znanstveniki okužijo plošče rastočih bakterij z virusnimi raztopinami v različnih koncentracijah in ugotovite število virusov v prvotni raztopini s štetjem bakterij, ki so umrle zaradi virusa okužba.
Nadenite si rokavice, napolnite 10 epruvet z 9 ml juhe in jih označite z "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" in tako naprej do "10 ^ -10." Te epruvete bodo uporabljene za serijska redčenja virusov, ki se uporabljajo za izračun faga titer. Ker lahko virusi narastejo do neverjetno visokih koncentracij, jih morate razredčiti, da jih lahko učinkovito štejete. Vsaka epruveta predstavlja desetkratno razredčitev virusa.
Vzemite 1 ml mešane kulture iz epruvete z oznako “10 ^ -1” in jo z novo pipeto prenesite v naslednjo epruveto z oznako “10 ^ -2”. Zmešajte tudi to epruveto.
Nadaljujte s tem vzorcem, da ustvarite serijsko serijo redčenja. Na koncu boste dobili 9 epruvet po 9 ml in 1 epruveto po 10 ml. Virusne obremenitve v vaših epruvetah bodo razredčene od 10-krat (prva cev) ali 100-krat (druga cev) do deset milijard krat (zadnja epruveta).
V agar dodajte dve kapljici bakterijske kulture in ga nežno premešajte. To so bakterije, ki bodo uničene in vam omogočajo, da preštejete število virusnih delcev v določeni raztopini.
Medtem ko so epruvete še v kopeli z vročo vodo, dodajte 1 ml vsake serijske razredčitve v njeno ustrezno agarno epruveto. Na primer, 1 ml vaše serijske razredčitve 10 ^ -1 mora iti v agar epruveto z oznako "10 ^ -1".
Vsako epruveto zmešajte in nato vsako epruveto vlijte v Petrijevo ploščo z ustrezno nalepko. To bo ustvarilo tanko plast agarja, ki je bil cepljen z bakterijami in virusi na vsaki plošči. Pustimo, da plošče čez noč zrastejo v inkubatorju.
Vzemite plošče iz inkubatorja in jih preglejte. Po celotni plošči bi morali videti oblačna območja, kjer so zrasle bakterije, razen majhnih čistih lis, imenovanih plaki. Te plošče so madeži odmrlih bakterij in vsaka plošča predstavlja en virus.
Vzemite število ploščic na plošči in pomnožite z 10. Če bi prešteli 157 plaket, bi dobili 1570.
Število, ki ste ga dobili v prejšnjem koraku, pomnožite z obratno številko na cevi za redčenje. Če je bila na primer plošča, ki ste jo izbrali, 10 ^ -5, bi 1570 pomnožili z 10 ^ 5, da bi dobili 157000000. Ta končna številka je vaš titer faga in predstavlja število virusov na ml vaše prvotne kulture.