Kako izračunati CFU iz redčenja

Učitelj vam izroči vzorec bakterij in vas vpraša: Koliko vitalnih mikroorganizmov je v tem vzorcu? Kaj to pomeni in kako to ugotovite? En način je iskanje števila enote, ki tvorijo kolonije(CFU).

CFU se nanaša na število posameznih kolonij katerega koli mikroorganizma, ki raste na plošči medija. Ta vrednost pa predstavlja število bakterij, ki se lahko razmnožujejo, saj so na plošči oblikovale kolonije. Obstaja formula CFU, ki vključuje vzorčenje.

Štetje števila bakterij v tekočem vzorcu je zelo težko. Preveč jih je in so premajhni. Poleg tega so nekateri med njimi morda mrtvi, drugi pa živi, ​​mrtvih pa ne bi smeli šteti v skupno število. Zanima vas samo izvedljivo bakterije ali bakterije, ki se lahko razmnožujejo. Torej, kako lahko ugotovite, koliko bakterij imate?

Na enak način, kot lahko sodelujete v anketi 1000 ljudi in jo uporabite za 10.000 ljudi, da ugotovite, kako bi lahko mislili o določeni temi. Lahko poskusite vzeti majhen del prvotnega vzorca in ugotoviti, koliko bakterij je ta del in nato izračunajte, da približno določite, koliko jih je lahko bilo v izvirniku vzorec.

Postopek za iskanje CFU danega vzorca vključuje najprej redčenje tega vzorca. Nato razredčitve nanesemo na plošče s pravilnim rastnim medijem. Večkratna redčenja so pogosto dobra ideja, saj je izvirni vzorec lahko zelo koncentriran.

Potem ko bakterijam damo omogočiti, da rastejo na ploščah dlje časa, posamezne kolonije se štejejo na krožniku. Če je bil vzorec preveč koncentriran, boste namesto posameznih kolonij videli veliko površino, pokrito z rastjo bakterij, ki se imenuje a travnik. To pomeni, da morate še dodatno razredčiti vzorec in poskusiti znova rasti, da boste lahko videli posamezne kolonije.

Ker posamezne kolonije prihajajo iz ene same bakterije, ki se je večkrat razmnožila, le te štejejo v CFU.

Primer uporabe razredčitev za izračun CFU bi lahko bil naslednji: Najprej iz začetnega vzorca, ki vam ga da učitelj, vzamete 1 ml in ga položite na ploščo. Naslednji dan vidite, da je travnik bakterij. To pomeni, da ne morete prešteti števila CFU. Naslednji korak je nekaj razredčitev.

Najprej vzamete 1 ml vzorca in ga razredčite v 9 ml tekočega medija. Ker je razredčenje en del vzorca na devet delov razredčila, se to imenuje razredčilo 1:10. Nato vzamete 1 ml razredčila 1:10 in dodate 9 ml tekočega medija. Ta razredčitev je razredčitev 1: 100. Na koncu naredite razredčitev 1: 1.000, tako da vzamete 1 ml razredčila 1: 100 in dodate 9 ml tekočega medija. Za vsako razredčitev imate zdaj 10 ml razredčene bakterijske kulture.

Razredčenja opravite, na plošče nanesete 0,5 ml razredčitev. Označite plošče, s katerimi je bila razredčena posoda.

Naslednji dan se vrnete in vidite, da imajo na vseh krožnikih nekaj posameznih kolonij. Vmes želite izbrati krožnik 30 in 300 kolonij. Vidite, da ima plošča za redčenje 1: 1000 približno 10 kolonij, kar pomeni, da ste vzorec preveč razredčili. Ta plošča ne bo v pomoč pri iskanju CFU.

Plošča za redčenje 1:10 ima veliko kolonij, morda več kot 300. V tem primeru lahko greste na ploščo 1: 100. Na tej plošči preštejete kolonije in ugotovite, da ima 179 kolonij. To pomeni, da 0,5 ml razredčila 1: 100 vsebuje 179 CFU. Kaj pa originalni vzorec?

Zdaj, ko imate nekaj podatkov, lahko opravite izračun CFU v prvotnem vzorcu.

1. Vzemite količino, ki ste jo posadili (0,5 ml), in pomnožite s faktorjem redčenja (0,01), da dobite 0,005. To morate storiti, da poiščete faktor razredčenja, ki je privedel do števila CFU. Tukaj vam je pol mililitra razredčitve 1: 100 omogočilo štetje CFU.

2. CFU delite iz razredčenja (179) z rezultatom iz 1. koraka (0.005), da dobite 35.800 CFU.

To pomeni, da prvotni 1 ml razredčenega vzorca vsebuje 35.800 CFU. Drug način, da to povemo, je, da ima prvotni vzorec 35.800 CFU / ml.

CFU je odlično orodje za ugotavljanje, koliko bakterij, gliv ali mikroorganizmov je v določenem vzorcu. Tu opisana metoda prevleke je še posebej koristna za zelo koncentrirane vzorce ali organizme, ki v tekoči kulturi ne uspevajo dobro.