Eden od klasičnih načinov določanja koncentracije mikrobov v vzorcu je razredčenje vzorca, gojenje mikrobov na ploščah in štetje kolonij. Prevlečeni mikrobi zrastejo iz enote, ki tvori kolonijo, sestavljene iz ene ali več celic, v vidno kolonijo, ki jo lahko vidimo in preštejemo. Bakterije so najpogostejši mikrobi za oceno s številom plošč. Število kolonij se uporablja za odkrivanje in štetje mikrobov v tleh, vodi in hrani. Protokoli za štetje kolonij poudarjajo natančen in metodičen pristop.
Razredčevanje vzorcev, prevleka in inkubacija
Če vzorec mikroba preprosto namažete na agarno ploščo, boste videli toliko enot, ki tvorijo kolonije, da se bodo posamezne kolonije združile, zaradi česar jih ne bo mogoče prešteti. Da bi rešili to težavo, zmešajte vzorec v tekoči medij, vzemite majhno količino te zmesi in jo še razredčite. Ta postopek ponovite šest do desetkrat. Končno razredčitev razporedite na agar ploščo in jo inkubirajte štiri do sedem dni, preden preštejete kolonije.
Ročno štetje
Primarni trik pri štetju kolonij je štetje vsake pike enkrat. Eden od pristopov je postaviti Petrijevo posodo na mrežno ozadje in prešteti kolonije v vsaki mrežni celici, tako da se v metodičnem vzorcu premika skozi vse celice. V pomoč je lahko tudi označevanje preštetih kolonij na zadnji strani petrijevke. Na splošno boste morali šteti vsaj tri krožnike; uporabljajte samo plošče, ki vsebujejo od 30 do 300 kolonij, da dobite zanesljive sklepe, predlaga Microbiology Network, podjetje, ki nudi svetovalne storitve laboratorijem in proizvajalcem. Plošče s kolonijami, ki jih je preveč, da bi jih lahko prešteli, ali s premalo kolonijami je treba ponovno prevleči iz nove razredčitve.
Avtomatizirano štetje
Človeška napaka prispeva k času ročnega štetja kolonij. Za večjo natančnost in učinkovitost postavite Petrijevo posodo v avtomatizirano napravo za štetje kolonij. Avtomatizirani števci kolonij posnamejo posodo, kolonije ločijo od ozadja in nato uporabijo algoritem za štetje kolonij na krožniku. Algoritmi imajo lahko težave pri razlikovanju kolonij, ko se dve ali več kolonij dotakneta na robovih, zato je to področje stalnega razvoja programske opreme.
Zapleteno štetje
Natančnost izračuna gostote mikrobov iz števila kolonij ima nekatere omejitve. Enote, ki tvorijo kolonije, so lahko ena celica, veriga celic ali cel kup celic. Predpostavlja se, da kolonija predstavlja eno celico, zato so koncentracije, izračunane iz števila kolonij, lahko nizke. Različni mikrobi potrebujejo različne pogoje rasti, kolonije na plošči pa predstavljajo samo tiste mikrobe, ki uspevajo na tem rastnem gojišču v teh inkubacijskih pogojih. Poleg tega štetje kolonij ne zabeleži odmrlih celic, kar je pomembno, kadar potrebujete koncentracijo celic v prvotnem vzorcu.