Kako izmeriti rast bakterij v Petrijevih jedeh

Bakterije gojijo v petrijevkah na trdnem mediju, znanem kot bakterijski agar, kjer nastajajo vzgojene krožne kolonije. Za razliko od posamezne bakterijske celice je kolonija skupina bakterij, ki je dovolj velika, da je vidna s prostim očesom. Rast bakterij lahko izmerimo s preprostim opazovanjem števila kolonij; vendar bolj kvantitativne metode vključujejo uporabo števnice ali pogosteje izvedljivo štetje plošč. Slednje se najpogosteje uporablja, saj daje tudi kvalitativne informacije, kot je učinek različnih pogojev rasti. Ker je v petrijevki lahko milijarde bakterij, je za merjenje najprej treba razredčiti vzorec, tako da je mogoče šteti število kolonij.

V epruveto dodajte 90 mikrolitrov začetne bakterijske kulture v 90 mikrolitrov medija za redčenje. Pokrov cevi dobro zaprite in nežno vrtinčite, da dobite homogeno zmes. Zdaj je vzorec ena desetina prvotne koncentracije.

Prenesite 10 mikrolitrov tega novega vzorca v novo epruveto, ki vsebuje 90 mikrolitrov medija za redčenje, in ga ponovno premešajte. Ponovno bo rezultat še bolj razredčen vzorec - zdaj bo stotinka prvotne koncentracije. To ponovite večkrat, dokler se prvotni vzorec ne razredči med 10

instagram story viewer
4 in 1010 krat. Poskrbite, da je vsaka epruveta označena s primerno razredčitvijo, na primer 10-1, 10-2 in tako naprej.

Na ploščo za agar nanesite 10 mikrolitrov zadnje razredčene raztopine. Z razpršilnim robom razporedimo bakterijsko raztopino po celotni površini agarne plošče. To ponovite še za dve plošči. Prav tako je običajno te korake za primerjavo izvesti z drugimi stopnjami redčenja. Prepričajte se, da ste označili dno plošč. Zamenjajte pokrove na vsaki plošči in pustite, da se plošče z agarjem nekaj minut sušijo bodisi na laboratorijski klopi pod plamenom bodisi v inkubatorju. Plošče postavite v inkubator, ki naj bo nastavljen na temperaturo, primerno za sev bakterij. Pustimo, da raste 12 do 16 ur.

Kolonije naj bodo vidne po 16 urah; vendar lahko nekatere genske spremembe zahtevajo dlje (na primer razvoj barve). Ko opazimo kolonije, vzamemo plošče in poiščemo takšne, ki imajo med 30 in 300 kolonijami. S trajnim označevalcem postavite piko na dno petrijevke - na stran agarja, ne na pokrov - kamor koli je skozi agar vidna kolonija. Štetje vsake pike markerja. Ponovite za vsako jed.

Če želite izmeriti količino bakterij v začetni kulturi za ta poskus, je treba pri izračunih razredčitev razredčiti na dva mesta. Prvič, ko ste iz epruvete vzeli en mikroliter, da ste ga dali v petrijevko, ste vzeli desetino razredčenega vzorca, zato morate vse pomnožiti z 10, da to obrnete. Poleg tega, če je bil faktor razredčenja v epruveti na primer 10-7, potem je treba število kolonij pomnožiti z 107 da se obrne učinek redčenja. V izračunih preprosto odstranite negativni znak iz eksponenta. Uporabite formulo:

[Število preštetih kolonij] × 10 × [kolikokrat je treba vzorec pomnožiti, da dosežemo prvotno koncentracijo: na primer 105] = Število enot, ki tvorijo kolonije (CFU) na mililiter izhodne kulture. To je rast bakterij v petrijevkah.

Teachs.ru
  • Deliti
instagram viewer