Obstaja veliko metod za ločevanje in prepoznavanje različnih spojin. Kromatografija je znanost, ki vam omogoča ločevanje sestavin mešanice. The Rf (včasih neformalno zapisano kot "RF vrednost") je del tega.
Obstaja veliko različnih vrst kromatografije. Tu je poudarek na najpreprostejši vrsti kromatografije: kromatografija na papirju ali tankoslojna kromatografija (TLC). Oba uporabljata isti splošni postopek, ki je opisan spodaj.
Kaj vključuje kromatografija?
Vse vrste kromatografije imajo a stacionarna faza in a mobilna faza. Stacionarna faza, kot bi lahko uganili iz imena, se ne premika. V papirni kromatografiji je stacionarna faza sam papir.
Za začetek ločevanja spojin se snov, ki jo je treba analizirati, napiše na spodnji rob papirja. Nato papir damo v čašo, ki vsebuje mobilno fazo, ki je topilo. Topilo mora biti na mestu, kjer je snov za analizo pikasta. Analita ne sme potopiti.
Tekočina se s kapilarnim delovanjem premakne navzgor po papirju. Če analit ali del analita privlači mobilna faza, se bo z njo premikal. Če ima močnejšo privlačnost za stacionarno fazo, se ne bo premaknil.
Ko se topilo do neke mere pomakne navzgor po stacionarni fazi, dobite kromatogram. Ta kromatogram vam pove nekaj o ločevanju različnih komponent v zmesi ali vam pove, katero snov imate. Kako?
Ločevanje in prepoznavanje komponent s pomočjo kromatograma
Če so pogoji za razvoj kromatograma enaki, se mora razdalja, ki jo premika določena snov, spremeniti. Ta razdalja se meri z formula zadrževalnega faktorja ali Rf.
Formula faktorja zadrževanja je:
Ta vrednost mora biti enaka za snov, če se kromatogram razvije na enak način.
To je koristno, če imate mešanico snovi.
Recimo, da imate na primer štiri vzorce: trije so standardi in eden mešanica. Vaša naloga je ugotoviti, katere komponente so v mešanici.
Kaj so standardi? Standardi so čisti vzorec snovi. To lahko za primerjavo zaženemo na kromatogramu.
Mešanico lahko zaženete, nato pa lahko določite, kako daleč delujejo različne komponente v njej.
Recimo, da ima Standard # 1 močno afiniteto do vode (mobilna faza). To pomeni, da bo z mobilno fazo potoval po papirju. Standard št. 2 pa ima močno afiniteto do papirja. To pomeni, da bo ostalo v mirujoči fazi. Nazadnje ima Standard # 3 afiniteto tako za vodo kot za papir. Predvidevate, da bo premaknil vmesni znesek.
Ugotovili ste, da se topilo premakne za 5,7 cm, medtem ko se standard # 1 premakne za 0,5 cm, standard # 2 premakne za 4,8 cm, standard # 3 pa za 2,9 cm. Kaj so R.f vrednosti za vsak standard?
Zdaj veste Rf vrednosti za standarde. Nato na drug kos papirja položite piko mešanice in pustite, da se kromatogram razvije, tako da ga postavite v vodo.
Ko ga odstranite, ugotovite, da sta dve piki ločeni od začetne pike, ki ste jo postavili. To verjetno pomeni, da sta v mešanici le dve komponenti. Nato morate ugotoviti, katerim od standardov ustrezata ti dve komponenti. Če želite to narediti, izmerite Rf vrednote.
Topilo se je premaknilo za 4,5 cm. Ena komponenta (imenovana komponenta 1) se je premaknila za 2,2 cm, druga pa za 3,9 cm (imenovana komponenta 2). Če želite videti, kateremu standardu ustrezajo te komponente, boste za izračun R morali uporabiti formulo faktorja zadrževanjaf vrednote.
Glede na te Rf vrednosti verjetno, da komponenta 1 ustreza standardu # 3, saj je Rf vrednosti so zelo podobne. Komponenta 2 je verjetno Standard # 2.