Puferske raztopine se upirajo spremembam pH, ker vsebujejo šibke kislinsko-bazične konjugate, ki nevtralizirajo ione H + in OH-. Puferske raztopine so sestavljene iz šibkih kislin ali baz in soli te kisline ali baze. Izbira ustreznega puferskega sistema je odvisna od območja pH za pufriranje. Večina bioloških reakcij se pojavi pri pH od 6 do 8. Fosfatni pufer pufrira v območju od 6,5 do 7,5. Puferji karboksilne kisline so uporabni od pH 3 do 6. Boratni puferji delujejo od pH 8,5 do 10. Aminokislinski puferji, kot sta glicin in histidin, delujejo v različnih območjih pH. Tris pufer je eden najpogosteje uporabljenih varovalnih sistemov v bioloških laboratorijih. Izračuni za Tris vmesno raztopino bodo uporabljeni v naslednjem primeru, vendar metodologija velja za katero koli vmesno raztopino.
Z zmnožkom molarnosti in prostornine končne raztopine določimo zahtevane mole baze. Na primer, če sta potrebna 2 litra 0,1 M raztopine pufra Tris, je potrebno število molov Trisa:
Izračunajte maso potrebnega pufra tako, da pomnožite število molov, potrebnih z molekulsko maso baze. Na primer, masa 0,2 mola baze Tris je enaka:
Osnovo raztopite v destilirani vodi z magnetno mešalno ploščo in mešalno ploščo. Raztopite ga v količini vode, ki je le malo manjša od končne prostornine raztopine (950 do 975 ml za vsak liter končne raztopine). PH pufra Tris se spreminja s koncentracijo in ga je treba prilagoditi, če uporabimo premajhen začetni volumen. Prav tako je najbolje, da pufer pripravimo na isti temperaturi, kot jo bomo uporabili med preskusom ali poskusom, saj ima Tris velike spremembe pH v temperaturi.
Nasveti
- Če želite prihraniti čas pri pripravi puferske raztopine, lahko uporabite predhodno pripravljene puferske koncentrate pri zahtevanem pH in razredčite za želeno molarnost in prostornino. Pripravite pufersko raztopino pri enaki temperaturi, kot jo boste uporabili, da se izognete pomembnim spremembam pH. Izogibajte se zamudnim uravnavanjem pH, titrirajte šele po razredčenju do želene koncentracije. Raztapljanje v premajhnem volumnu povzroči ponavljajoče se titracije.
Opozorila
- Pri ravnanju s kislinami in bazami bodite previdni. Nosite zaščitna očala.
O avtorju
Carla Boulianne je po izobrazbi evolucijska biologinja in po strasti samostojna pisateljica. Poleg tega, da piše za Demand Studios in eHow, je avtorica za Parenting a Gifted Child na Suite101.com. Navdušuje pri raziskovanju novih tem z obsežnimi raziskavami.
Foto krediti
Fotografija avtor Emmi P. @ morgueFile.com