Visoko zmogljiva tekočinska kromatografija (HPLC) je laboratorijska tehnika, ki se uporablja za ločevanje in identifikacijo spojin. To je vrsta kolonske kromatografije, ki se pri ločevanju opira na različne polarnosti spojin v raztopini. HPLC se razlikuje od standardne kolonske kromatografije, ker uporablja pritisk, da raztopino hitreje potisne skozi kolono, zato daje hitrejše in včasih natančnejše rezultate. Cilj je ločiti spojine v koloni in izstopiti ločeno.
Zaradi hitrosti HPLC in odvisnosti od različnih polarnosti spojin sta dve spojini z podobna struktura in polarnosti lahko istočasno ali skoraj enako zapustijo kromatografski aparat čas. To je znano kot koelucija. Koelucija otežuje natančno določanje, kateri del zmesi se je eluirala v kateri točki.
HPLC običajno uporablja stekleni stolpec, napolnjen s kroglicami iz različnih materialov. Mešanice, ki jih potiskajo skozi kolono, vsebujejo kemikalije, ki se na kroglice vežejo z različno močjo. Trdnost vezave, ki je odvisna od podobnosti polarnosti, določa, kako dolgo se bo kemikalija vezala na kroglico, preden se bo sprostila. Nekatere spojine se vežejo tako močno, da se v bistvu nikoli ne sprostijo iz kroglic v koloni in jih nikoli ne izmerijo v raztopini, ki izstopa iz kolone.
Tipične laboratorijske tehnike ločevanja vključujejo razvoj testa ali metode ločevanja in nato izvajanje tega testa za ločevanje posameznih spojin od raztopine. Vendar to običajno povzroči več rešitev, za katere je treba tudi opraviti postopke, kar vodi do eksponentnega povečanja kompleksnosti. Čeprav lahko HPLC ta postopek pogosto poenostavi in pospeši, lahko stroški razvoja naprave HPLC postanejo izjemni. Razvoj naprave HPLC, čeprav je veliko bolj učinkovit, je veliko dražji od razvoja drugih testov za ločevanje spojin. Zaradi tega za številne majhne laboratorije v zasebni lasti ni finančno izvedljivo.
HPLC se ne uporablja samo za ločevanje enostavnih spojin, temveč se uporablja tudi za izolacijo specifičnih beljakovin iz celične mešanice. V tem primeru so kroglice v koloni običajno prevlečene s protitelesom, specifičnim za beljakovino, ki jo morate zbrati. Proteini vežejo protitelesa in preostalo raztopino spustijo skozi kolono, nato pa beljakovine sprostijo z drugo raztopino in jih zberejo. To zahteva, da visoko usposobljen tehnik ves čas nadzoruje stolpec in se prepriča, da postopek teče natančno po načrtih.