Za podatke iz prve epruvete z encimskim testom narišite tabelo koncentracije izdelka glede na čas. Opomba: vodoravna os mora biti "čas", navpična os pa mora biti "koncentracija izdelka".
Izračunajte linearno regresijsko črto za podatkovne točke, ki ste jih narisali v 1. razdelku, 1. korak. Medtem ko lahko Excel in grafični kalkulatorji enostavno določijo ta linearni model, lahko izpeljete oceno regresije naklon črte z deljenjem razlike v koncentraciji izdelka med sosednjimi podatkovnimi točkami z njihovo časovno razliko.
Zapišite naklon linearne regresijske črte iz oddelka 1, korak 2, kot "začetno hitrost reakcije (Vo)." Opomba: v modelu regresijske črte "[koncentracija izdelka] = m [čas] + b" je koeficient "m" naklon.
Ponovite korake 1, 2 in 3 za preostale epruvete v preskusu.
Narišite obratno koncentracijo substrata za vsako epruveto v primerjavi z inverzno začetno hitrostjo reakcije (iz oddelka 1, korak 4). Na primer, če je začetna hitrost za epruveto z začetno koncentracijo substrata 50 mikromolarnih (uM) je bila 80 uM / s, inverzne vrednosti bi bile 1/50 uM za koncentracijo substrata in 1/80 uM / s za začetno hitrost. Opomba: inverzna koncentracija podlage mora biti na vodoravni osi, inverzna začetna hitrost pa na navpični osi.
Opomba: koncentracija substrata mora biti na vodoravni osi, začetna hitrost reakcije pa na navpični osi.
Določite linearno regresijsko črto za grafikon, ki ste ga narisali v 2. koraku, 1. korak. Opomba: ker boste morali poznati presek y za regresijsko črto, morate vnesti točke iz Razdelek 2, 1. korak v Excel ali v grafični kalkulator in uporabite vgrajeno regresijsko modeliranje funkcionalnost.
1 delite z presečiščem y od linearne regresijske črte. To vam bo dalo vrednost inverzne vrednosti Vmax, največje hitrosti reakcije za encim. Opomba: če ima linearni regresijski model obliko "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + B," potem bi bila vrednost "b" presek y. Delite 1 z "b" za izračun inverzne vrednosti Vmax.
Za izračun dejanske vrednosti Vmax delite 1 z rezultatom iz oddelka 2, 3. korak.
Določite koncentracijo encima v prvotnem testu (glejte surove podatke). Opomba: koncentracija encimov je enaka za vse epruvete; v preskusu se razlikujejo le koncentracije substrata.
Vmax (iz oddelka 2, korak 4) razdelite s koncentracijo encimov (iz oddelka 2, korak 5). Rezultat je vrednost Kcat.
Andy Pasquesi, čikaški tekstopisec, ima bogate izkušnje s pisanjem avtomobilov (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), finančnih storitev (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), zdravstvo (Abbott) in potrošniško blago (Sony, Motorola, Knoll). Diplomiral je iz angleščine na univerzi Harvard, vendar ne skrbi za oksfordsko vejico.