Hlavným dôvodom, prečo zafarbiť vzorku pred jej vložením pod mikroskop, je lepšie sa na ňu pozrieť, ale zafarbenie robí oveľa viac, než len zvýraznenie obrysov buniek. Niektoré škvrny môžu preniknúť cez bunkové steny a zvýrazniť ich bunkové komponenty, čo môže pomôcť vedcom vizualizovať metabolické procesy. Škvrny tiež pomáhajú rozlišovať medzi živými bunkami a mŕtvymi. Farbenie navyše umožňuje vedcom spočítať počet buniek konkrétneho typu v rámci určitej biomasy. Existuje dvadsať alebo viac rôznych druhov škvŕn a každá z nich má svoj účel.
TL; DR (príliš dlhý; Nečítali)
Hlavným účelom farbenia je zvýraznenie buniek a ich častí. Existuje viac ako 20 rôznych druhov škvŕn a typ použitej škvrny závisí od toho, čo hľadáte.
Druhy škvŕn
Výber lazúry závisí od toho, čo hľadáte. Nie všetky škvrny sú vhodné pre živé bunky, ale medzi tie patria napríklad Bismarckova hnedá, toluénová červená, nílska modrá a nílska červená a niektoré žiarivky používané na zvýraznenie DNA. Niektoré škvrny zvýrazňujú spóry, iné zisťujú lipidy a bielkoviny a iné menia farbu za prítomnosti škrobov. Účel vyšetrenia určuje najlepší typ škvrny, ktorý sa má použiť. Napríklad lekár prevádzajúci PAP ster by použil Eosin Y. Je to kyslé fluorescenčné farbivo, ktoré sčervená, keď príde do styku s červenými krvinkami, cytoplazmou a bunkovými membránami. Používa sa tiež na testovanie drene.
V niektorých prípadoch môže vyšetrovateľ použiť viac ako jednu škvrnu. Napríklad hematoxylín je škvrna, ktorá sfarbuje jadrá buniek do modra. Pri použití v spojení s eozínom, ktorý zafarbí ostatné časti bunky na červeno alebo ružovo, poskytuje silnejší kontrast a uľahčuje odlíšenie jadier. Ak sa tieto dve škvrny použijú súčasne, je ľahšie skúmať vzorky PAP a krvnej drene.
Gramova škvrna: Pracovníci nemocnice používajú Gramovu škvrnu na identifikáciu škodlivých baktérií. Toto je vlastne séria farbív, ktoré majú rôzne účinky na rôzne druhy baktérií a poskytujú lekárom dôležitý diagnostický nástroj. Gramova škvrna je trojdielny proces. Do prvej sa pridá Huckerova krištáľovo fialová, ktorá zafarbí všetky baktérie jednotnou fialovou farbou. V ďalšom štádiu sa pridá jódové farbivo, ktoré spôsobuje priľnutie farby k grampozitívnym bunkám, ktorými sú primárne Staphylococcus a Streptococcus. Škvrna sa vymyje a gram-pozitívne bunky zostanú zreteľne fialové; potom sa zavedie tretie farbivo, safranín O, aby sa zvýšil kontrast medzi gramnegatívnymi baktériami a zvyškom materiálu v sklíčku.
Postup farbenia
Pri príprave vzorky na podložnom sklíčku ju môžete pripevniť nasucho alebo namokro, nakrájať na tenký diel alebo rozotrieť. Pri použití škvrny je obvyklým spôsobom namočiť vzorku, čo znamená umiestniť kvapku vody na podložné sklíčko, vložiť vzorku do vody a zakryť ju krycím sklíčkom. Potom pomocou kvapkadla nanesiete škvrnu na roh podložného sklíčka a necháte ju kapilárne pôsobiť na vzorku. Na prilákanie vody pomôže položiť na opačnú stranu šmýkačky papierovú utierku. Akonáhle sa škvrna rozšíri po celom sklíčku, je vzorka pripravená na vyšetrenie.