Váš učiteľ vám odovzdá vzorku baktérií a opýta sa vás: Koľko životaschopných mikroorganizmov je v tejto vzorke? Čo to znamená a ako na to prídete? Jednou metódou je zistenie počtu jednotky tvoriace kolónie(CFU).
Čo sú CFU?
CFU označuje počet jednotlivých kolónií každého mikroorganizmu, ktoré rastú na platni média. Táto hodnota zase predstavuje počet baktérií schopných replikácie, keď vytvorili na doštičke kolónie. Existuje vzorec CFU, ktorý zahŕňa vzorkovanie.
Ako nájdete CFU?
Spočítať počet baktérií v tekutej vzorke je veľmi ťažké. Je ich príliš veľa a sú príliš malé. Niektoré z nich môžu byť navyše mŕtve a iné živé a mŕtvi by sa nemali započítavať do celkového počtu. Zaujíma ťa iba životaschopný baktérie alebo baktérie, ktoré sa môžu replikovať. Ako teda zistiť, koľko máte baktérií?
Rovnakým spôsobom, ako môžete urobiť prieskum 1 000 ľudí, ktorý sa použije na 10 000 ľudí, aby ste zistili, ako by mohli uvažovať o určitej téme. Môžete sa pokúsiť odobrať malú časť svojej pôvodnej vzorky a zistiť, koľko baktérií sa v nej nachádza tejto časti a potom vypočítajte, aby ste odhadli, koľko ich mohlo byť v origináli vzorka.
Používanie zriedení na nájdenie CFU
Postup hľadania CFU danej vzorky zahŕňa prvé zriedenie tejto vzorky. Riedenia sa potom naliajú na platne so správnym rastovým médiom. Viacnásobné zriedenia sú často dobrý nápad, pretože pôvodná vzorka môže byť veľmi koncentrovaná.
Potom, čo necháte baktérie po určitý čas rásť na doskách, jednotlivé kolónie sa počítajú na tanieri. Pokiaľ bola vzorka príliš koncentrovaná, uvidíte namiesto jednotlivých kolónií veľkú oblasť pokrytú bakteriálnym rastom, ktorá sa nazýva a trávnik. To znamená, že by ste mali svoju vzorku ďalej zriediť a pokúsiť sa znova rásť, aby ste videli jednotlivé kolónie.
Pretože jednotlivé kolónie pochádzajú z jednej baktérie, ktorá sa mnohonásobne replikovala, iba tieto sa počítajú do CFU.
Experimentálny postup pri hľadaní CFU
Príklad použitia riedenia na výpočet CFU môže byť nasledovný: Najskôr z počiatočnej vzorky, ktorú vám dá učiteľ, vezmete 1 ml a nanesiete ju na tanier. Na druhý deň uvidíte, že je tu trávnik baktérií. To znamená, že nemôžete spočítať počet CFU. Ďalším krokom je vytvorenie niektorých zriedení.
Najskôr odoberiete 1 ml vzorky a zriedite ju do 9 ml tekutého média. Pretože riedenie je jedna časť vzorky na deväť častí riedidla, označuje sa to ako riedenie 1:10. Potom si vezmite 1 ml zriedeného roztoku 1:10 a pridajte ho do 9 ml tekutého média. Toto zriedenie je zriedenie 1: 100. Nakoniec urobíte zriedenie 1: 1 000 tak, že odoberiete 1 ml zriedenia 1: 100 a pridáte 9 ml tekutého média. Pre každé zriedenie máte teraz 10 ml zriedenej bakteriálnej kultúry.
Po dokončení zriedenia nalejte 0,5 ml zriedeného roztoku na platne. Uistite sa, že ste označili doštičky, na ktoré sa nanášalo riedenie.
Na druhý deň sa vrátite a uvidíte, že všetky platne majú na sebe niekoľko jednotlivých kolónií. Chceš si vybrať tanier medzi 30 a 300 kolónií. Uvidíte, že doštička na riedenie 1: 1 000 má asi 10 kolónií, čo znamená, že ste vzorku zriedili. Táto doska nebude užitočná pri hľadaní CFU.
Doska na riedenie 1:10 má veľa kolónií, možno viac ako 300. V takom prípade môžete ísť na tanier 1: 100. Spočítate kolónie na tejto doske a zistíte, že má 179 kolónií. To znamená, že 0,5 ml zriedenia 1: 100 obsahuje 179 CFU. Čo však s pôvodnou vzorkou?
Čo je to výpočet CFU?
Teraz, keď máte nejaké údaje, môžete urobiť výpočet CFU v pôvodnej vzorke.
1. Vezmite množstvo, ktoré ste naočkovali (0,5 ml) a vynásobte zrieďovacím faktorom (0,01), čím získate 0,005. Musíte to urobiť, aby ste našli faktor riedenia, ktorý priniesol váš počet CFU. Tu vám pol mililitra zriedenia 1: 100 umožnila počítať CFU.
2. Vydeľte CFU od zriedenia (179) výsledkom z kroku 1 (0,005), čím sa získa 35 800 CFU.
To znamená, že pôvodný 1 ml vzorky, ktorá bola zriedená, obsahuje 35 800 CFU. Ďalším spôsobom, ako to povedať, je povedať, že pôvodná vzorka má 35 800 CFU / ml.
CFU je vynikajúci nástroj na zistenie počtu baktérií, plesní alebo akýchkoľvek mikroorganizmov v danej vzorke. Tu opísaná metóda platňovania je obzvlášť užitočná pre veľmi koncentrované vzorky alebo organizmy, ktoré v tekutej kultúre nerastú dobre.
