Ako merať bakteriálny rast v Petriho miskách

Baktérie sa pestujú v Petriho miskách na pevnom médiu známom ako bakteriálny agar, kde sa vytvárajú vyvýšené kruhové kolónie. Na rozdiel od samostatnej bakteriálnej bunky je kolónia skupina baktérií dostatočne veľká na to, aby boli viditeľné voľným okom. Rast baktérií je možné merať jednoduchým pozorovaním počtu kolónií; kvantitatívnejšie metódy však zahŕňajú použitie počítacej komory alebo častejšie počtu živých platní. Posledná zmienka sa používa najčastejšie, pretože poskytuje aj kvalitatívne informácie, ako je napríklad vplyv rôznych podmienok rastu. Pretože v Petriho miske môžu byť miliardy baktérií, meranie vyžaduje najskôr zriedenie vzorky, aby bolo možné spočítať počet kolónií.

V skúmavke pridajte 10 mikrolitrov počiatočnej bakteriálnej kultúry do 90 mikrolitrov riediaceho média. Uzavrite pevne tubu a jemne vortexujte, aby ste dosiahli homogénnu zmes. Teraz je vzorka desatinou pôvodnej koncentrácie.

Preneste 10 mikrolitrov tejto novej vzorky do novej skúmavky obsahujúcej 90 mikrolitrov riediaceho média, znova ju premiešajte. Výsledkom bude opäť vzorka, ktorá sa ďalej zriedi - teraz to bude stotina pôvodnej koncentrácie. Toto opakujte niekoľkokrát, kým sa pôvodná vzorka nezriedi medzi 10

instagram story viewer
4 a 1010 krát. Uistite sa, že je každá skúmavka označená správnym riedením, napríklad 10-1, 10-2 a tak ďalej.

Na agarovú platňu sa nadávkuje 10 mikrolitrov posledného zriedenia, ktoré bolo dokončené. Pomocou rozširovacej hrany rozdeľte bakteriálny roztok po celej ploche agarovej platne. Opakujte to pre ďalšie dva pláty. Pre porovnanie je tiež bežné vykonať tieto kroky s inými úrovňami zriedenia. Uistite sa, že ste označili spodné časti tanierov. Nasaďte na každú platňu viečka a agarové platne nechajte niekoľko minút sušiť buď na laboratórnej lavici pod plameňom, alebo v inkubátore. Doštičky vložte do inkubátora, ktorý by mal byť nastavený na vhodnú teplotu pre kmeň baktérií. Nechajte rásť 12 až 16 hodín.

Kolónie by mali byť viditeľné po 16 hodinách; niektoré genetické modifikácie však môžu vyžadovať dlhšie (napríklad vývoj farby). Keď sú kolónie pozorovateľné, vyberte ich a nájdite tie, ktoré obsahujú 30 až 300 kolónií. Trvalým značkovačom položte na spodok Petriho misky bodku - stranu s agarom, nie viečko - všade, kde je cez agar viditeľná kolónia. Spočítajte každú značku. Opakujte pre každé jedlo.

Na meranie množstva baktérií vo východiskovej kultúre pre tento experiment je potrebné pri výpočtoch obrátiť riedenie na dvoch miestach. Najskôr, keď ste vybrali jeden mikroliter zo skúmavky na vloženie do Petriho misky, zobrali ste desatinu zriedenej vzorky, takže musíte všetko vynásobiť desiatimi, aby ste to zvrátili. Okrem toho, ak bol riediaci faktor v skúmavke napríklad 10-7, potom sa musí počet kolónií vynásobiť 107 aby sa zvrátil riediaci účinok. Vo výpočtoch jednoducho odstráňte záporné znamienko od exponenta. Použite vzorec:

[Počet spočítaných kolónií] × 10 × [koľkokrát sa musí vzorka namnožiť, aby sa získala pôvodná koncentrácia: napríklad 105] = Počet jednotiek tvoriacich kolónie (CFU) na mililiter počiatočnej kultúry. Toto je bakteriálny rast vo vašich Petriho miskách.

Teachs.ru
  • Zdieľam
instagram viewer