Existuje mnoho metód na separáciu a identifikáciu rôznych zlúčenín. Chromatografia je veda, ktorá umožňuje oddeliť zložky zmesi. The Rf (niekedy neformálne napísané ako „hodnota RF“) je súčasťou.
Existuje mnoho rôznych druhov chromatografie. Tu sa zameriame na najjednoduchší druh chromatografie: papierovú chromatografiu alebo tenkovrstvovú chromatografiu (TLC). Oba používajú rovnaký všeobecný postup, ktorý je popísaný nižšie.
Čo zahŕňa chromatografia?
Všetky typy chromatografie majú a stacionárna fáza a a mobilná fáza. Stacionárna fáza, ako asi tušíte z názvu, sa nehýbe. Pri papierovej chromatografii je stacionárnou fázou samotný papier.
Na začatie separácie zlúčenín sa látka, ktorá sa má analyzovať, nanesie na bodku na spodnom okraji papiera. Potom sa papier vloží do kadičky obsahujúcej mobilnú fázu, ktorou je rozpúšťadlo. Rozpúšťadlo by malo byť pod bodom, kde je látka pre analýzu bodkovaná. Analyt by nemal byť ponorený.
Kvapalina sa pohybuje hore papierom kapilárnym pôsobením. Ak je analyt alebo jeho časť priťahovaná k mobilnej fáze, bude sa pohybovať s ňou. Ak má pre stacionárnu fázu silnejšiu príťažlivosť, nepohne sa.
Po tom, čo sa rozpúšťadlo do istej miery posunie nahor zo stacionárnej fázy, máte chromatogram. Tento chromatogram vám povie niečo o separácii rôznych zložiek v zmesi alebo povie, akú látku máte. Ako?
Oddeľovanie a identifikácia komponentov pomocou chromatogramu
Ak sú podmienky pre vývoj chromatogramu rovnaké, potom by sa mala zmeniť vzdialenosť, ktorú sa konkrétna látka pohybuje. Táto vzdialenosť sa meria pomocou vzorec retenčného faktora alebo Rf.
Vzorec retenčného faktora je:
Táto hodnota by mala byť rovnaká pre látku, ak je chromatogram vyvíjaný rovnakým spôsobom.
To je užitočné, ak máte zmes látok.
Povedzme napríklad, že máte štyri vzorky: Tri sú štandardy a jedna je zmes. Vašou úlohou je určiť, ktoré komponenty sú v zmesi.
Čo sú to normy? Normy sú čistou vzorkou látky. Toto je možné vykonať na chromatograme ako porovnanie.
Zmes môže byť spustená, potom môžete určiť, ako ďaleko bežia rôzne zložky v nej.
Povedzme, že štandard # 1 má silnú afinitu k vode (mobilná fáza). To znamená, že bude cestovať po papieri s mobilnou fázou. Štandard č. 2 na druhej strane má silnú afinitu k papieru. To znamená, že zostane v stacionárnej fáze. A nakoniec, štandard # 3 má afinitu k vode aj k papieru. Predpokladáte, že sa to bude pohybovať v medzisúčte.
Zistíte, že rozpúšťadlo sa pohybuje o 5,7 cm, zatiaľ čo Standard # 1 sa pohybuje o 0,5 cm, Standard # 2 o 4,8 cm a Standard # 3 o 2,9 cm. Čo sú to R.f hodnoty pre každú normu?
Teraz poznáte R.f hodnoty pre normy. Ďalej na ďalší kúsok papiera položte bodku zmesi a nechajte chromatogram vyvíjať tak, že ho umiestnite do vody.
Po odstránení zistíte, že existujú dve bodky, ktoré sa oddeľujú od počiatočnej bodky, ktorú ste umiestnili. To pravdepodobne znamená, že vo vašej zmesi sú iba dve zložky. Ďalej musíte zistiť, ktorému zo štandardov tieto dve zložky zodpovedajú. Za týmto účelom zmeriate Rf hodnoty.
Rozpúšťadlo sa pohybovalo 4,5 cm. Jeden komponent (nazývaný komponent 1) sa pohyboval o 2,2 cm a druhý sa pohyboval o 3,9 cm (nazývaný komponent 2). Aby ste zistili, ktorej norme tieto komponenty zodpovedajú, budete musieť na výpočet R použiť vzorec retenčného faktoraf hodnoty.
Vzhľadom na tieto R.f hodnôt je pravdepodobné, že komponent 1 zodpovedá štandardu # 3, pretože Rf hodnoty sú veľmi podobné. Komponent 2 je pravdepodobne štandardom č.