Pufrové roztoky odolávajú zmenám pH, pretože obsahujú slabé acidobázické konjugáty, ktoré neutralizujú H + a OH- ióny. Tlmivé roztoky pozostávajú zo slabých kyselín alebo zásad a solí tejto kyseliny alebo zásady. Výber vhodného tlmivého systému závisí od rozsahu pH pre tlmenie. Väčšina biologických reakcií sa vyskytuje pri rozmedzí pH 6 až 8. Fosfátové pufre pufrujú v rozmedzí pH 6,5 až 7,5. Pufre na báze karboxylových kyselín sú užitočné od pH 3 do 6. Boritanové pufre fungujú od pH 8,5 do 10. Aminokyselinové tlmivé roztoky, ako je glycín a histidín, účinkujú v rôznych rozsahoch pH. Pufr Tris je jedným z najbežnejšie používaných pufrovacích systémov v biologických laboratóriách. V nasledujúcom príklade sa použijú výpočty tlmivého roztoku Tris, ale metodika sa použije pre akýkoľvek tlmivý roztok.
Použite produkt molarity a objemu výsledného roztoku na stanovenie požadovaných molov bázy. Napríklad, ak sú potrebné 2 litre 0,1 M roztoku pufra Tris, potom je požadovaný počet mólov Tris:
Vypočítajte požadovanú hmotnosť pufra vynásobením počtu potrebných mólov molekulovou hmotnosťou bázy. Napríklad hmotnosť 0,2 mólu Trisovej bázy sa rovná:
Rozpusťte bázu v destilovanej vode pomocou magnetickej miešačky a horúcej platne. Rozpustite ju v objeme vody iba o málo menšom, ako je objem konečného roztoku (950 až 975 ml na každý liter konečného roztoku). Hodnota pH pufra Tris sa mení s koncentráciou a je potrebné ju upraviť, ak sa použije príliš malý počiatočný objem. Najlepšie je tiež pripraviť pufer pri rovnakej teplote, aký sa použije počas testu alebo experimentu, pretože Tris má veľké zmeny pH v závislosti na teplote.
Tipy
- Ak chcete ušetriť čas pri príprave tlmivého roztoku, môžete použiť vopred pripravené koncentráty tlmivého roztoku s požadovaným pH a zriediť na požadovanú molaritu a objem. Pripravte tlmivý roztok pri rovnakej teplote, ktorá bude použitá, aby sa zabránilo výrazným zmenám pH. Vyvarujte sa časovo náročným úpravám pH, titrujte ich až po zriedení na požadovanú koncentráciu. Rozpustenie v príliš malom objeme povedie k opakovaným titráciám.
Varovania
- Pri manipulácii s kyselinami a zásadami buďte opatrní. Noste ochranné okuliare.
O autorovi
Carla Boulianne je evolučná biológia trénovaním a spisovateľkou na voľnej nohe vášňou. Okrem toho, že píše pre Demand Studios a eHow, je autorkou článkov pre Rodičovstvo nadaných detí na Suite101.com. Nadchne ju objavovanie nových tém prostredníctvom rozsiahleho výskumu.
Fotoúvery
Foto s láskavým dovolením Emmi P. @ morgueFile.com