Как читать гель-электрофорез

Гель-электрофорез - это метод, используемый в лабораториях для разделения ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота). Его также можно использовать для разделения РНК и белков.

Считывание результатов гель-электрофореза позволяет исследователям определить размер нитей в образце. Чтобы понять, как работает этот процесс, нужно сначала изучить определение гель-электрофореза.

Гель-электрофорез - мощный инструмент, используемый в молекулярная биология для определения размера и электрического заряда ДНК, РНК и белков. Вы начинаете с использования фрагментов ДНК, которые были переварены ферментами из более крупной цепи ДНК.

Используя в качестве результатов интенсивность полосы гель-электрофореза, вы можете определить размер фрагментов. Тогда можно получить Отпечаток ДНК.

Как видно из «электро» части слова, определение гель-электрофореза влечет за собой использование электрического поля. Используется специальный аппарат, содержащий буферный раствор, покрывающий электроды, углубление для подвешивания геля внутри и сами электроды.

Гель-электрофорез требует использования геля, сформированного в виде пластинки, обычно сделанной из очищенной версии агара из морских водорослей, называемого агарозой.

Гели агарозы сделать пористую матрицу, через которую заряженные молекулы разных размеров могут перемещаться с разной скоростью. Химическое вещество, называемое бромидом этидия (EtBr), добавляется в раствор геля перед заливкой в ​​форму.

Если вам нужно разделить очень маленькие молекулы ДНК или белка, вам может потребоваться полиакриламидный гель вместо агарозы. Будьте осторожны при использовании полиакриламида, поскольку он нейротоксичен.

В форму для геля агарозы помещается специальный гребешок, а после его застывания осторожно вынимается. Сюда помещают фрагмент ДНК или другие молекулярные образцы, предварительно смешанные со специальным загрузочным красителем. В загрузка красителя просто отслеживать движение ДНК, иначе это не видно.

Также есть колодец, в котором есть то, что называется Лестница ДНК или маркер. Это служит высококачественным шаблоном с известными размерами полос для сравнения размеров с исследуемыми образцами ДНК. После приложения электрического поля эти отрицательно заряженные молекулы пройдут через гель к положительному концу.

Как только молекулы дойдут до конца геля, пора читать. результаты гель-электрофореза. Краситель EtBr в геле легко связывается с ДНК, отсюда и его использование, и тогда вы можете увидеть полосы ДНК, флуоресцирующие в УФ-свете.

Вы должны быть очень осторожны, чтобы не прикасаться к бромиду этидия, поскольку его сродство к ДНК также означает, что он может его раскрутить; поэтому он считается мутагеном. Теперь доступны более новые и безопасные красители, хотя их цена выше.

УФ-свет показывает интенсивность полосы гель-электрофореза ДНК или других молекулярных образцов. Расположение полос на геле показывает размер Фрагмент ДНК. В интенсивность полосы гель-электрофореза показывает концентрацию молекулы.

Теперь вы можете сравнить полосы ДНК в ваших образцах с образцом лестничной диаграммы ДНК. Известные размеры полос лестницы помогут вам определить относительный размер исследуемой ДНК.

Гель-электрофорез применялся в Дактилоскопия ДНК и судебная экспертиза. Это помогло исследователям получить информацию о геномах многих видов. Использование высококачественных результатов гель-электрофореза очень важно для этих важных областей.

Поэтому очень важно работать с высококачественными ингредиентами и проявлять большую осторожность при приготовлении гелей. Важно предотвратить загрязнение образцов ДНК РНК или белками.

Обязательно используйте чистый буфер, аккуратно налейте гель, чтобы его углубления были равномерно сформированы, и держите все реагенты при нужной температуре. Гель-электрофорез Интенсивность полосы должна быть яркой и чистой, без следов другой ДНК на заднем плане и без мазков РНК или белков, загрязняющих гель.