Основная причина, по которой вы окрашиваете образец перед тем, как поместить его под микроскоп, заключается в том, чтобы лучше рассмотреть его, но окрашивание делает гораздо больше, чем просто подчеркивает контуры клеток. Некоторые пятна могут проникать через клеточные стенки и выделять клеточные компоненты, и это может помочь ученым визуализировать метаболические процессы. Пятна также помогают отличить живые клетки от мертвых. Более того, окрашивание позволяет ученым подсчитать количество клеток определенного типа в определенной биомассе. Существует двадцать или более различных типов пятен, и каждое из них имеет свое предназначение.
TL; DR (слишком длинный; Не читал)
Основная цель окрашивания - выделить клетки и части клеток. Существует более 20 различных типов пятен, и тип пятна, который вы используете, зависит от того, что вы ищете.
Типы пятен
Выбор морилки зависит от того, что вы ищете. Не все красители подходят для живых клеток, но к ним относятся коричневый Бисмарк, красный толуол, нильский синий и нильский красный, а также некоторые флуоресцентные средства, используемые для выделения ДНК. Некоторые пятна выделяют споры, некоторые - липиды и белки, а некоторые меняют цвет в присутствии крахмала. Цель исследования определяет, какое пятно лучше всего использовать. Например, практикующий врач, проводящий мазок Папаниколау, будет использовать Eosin Y. Это кислый флуоресцентный краситель, который становится красным при контакте с эритроцитами, цитоплазмой и клеточными мембранами. Его также используют для исследования костного мозга.
В некоторых случаях исследователь может использовать более одного красителя. Например, гематоксилин - это краситель, который окрашивает ядра клеток в синий цвет. При использовании в сочетании с эозином, который окрашивает другие части клетки в красный или розовый цвет, он обеспечивает более сильный контраст и облегчает дифференциацию ядер. Мазки PAP и образцы костного мозга легче исследовать, когда эти два красителя используются вместе.
Пятно по Граму: Работники больниц используют окраску по Граму для выявления вредных бактерий. На самом деле это серия красителей, которые по-разному действуют на разные типы бактерий и дают врачам важный диагностический инструмент. Окрашивание по Граму - это трехэтапный процесс. В первом добавляется кристаллический фиолетовый Хакера, который окрашивает все бактерии в однородный фиолетовый цвет. На следующем этапе добавляется краситель йодом, который заставляет цвет прилипать к грамположительным клеткам, которыми в первую очередь являются стафилококки и стрептококки. Пятно смывается, оставляя грамположительные клетки отчетливого фиолетового цвета; затем вводится третья окраска, сафранин О, чтобы усилить контраст между грамотрицательными бактериями и остальным материалом на предметном стекле.
Процедура окрашивания
При подготовке образца на предметном стекле его можно монтировать в сухом или влажном состоянии, можно разрезать на тонкий срез или размазывать. При использовании красителя обычная процедура заключается в мокрой фиксации образца, что означает каплю воды на предметное стекло, опускание образца в воду и покрытие его покровным стеклом. Затем вы наносите краситель пипеткой на угол предметного стекла и позволяете ему притягиваться к образцу за счет капиллярного действия. Поместите бумажное полотенце с противоположной стороны горки, чтобы привлечь воду. Как только пятно распространилось по всему стеклу, образец готов к исследованию.
