Жидкий питательный бульон используется для культивирования таких бактерий, как кишечная палочка. Рецепты этого бульона различаются в зависимости от вида бактерий и наличия генетических модификаций, например, устойчивости к антибиотикам. Бульон можно затвердеть, добавив агар, который позволяет бактериям образовывать отдельные колонии, тогда как в жидкой культуре они просто рассеиваются по всему объему. Это базовый, но важный метод для продвинутых методов, таких как клонирование генов или микробиологические анализы. В этой статье предполагается, что стандартные лабораторные штаммы кишечной палочки должны культивироваться на чашках с агаром с бульоном Лурия (LB) (или чашках Петри).
Взвесьте 10 граммов триптона бактериального класса, 5 граммов дрожжевого экстракта, 5 граммов хлорида натрия, 15 граммов агара или агарозы и 1 миллилитр 1 н. Гидроксида натрия. Смешайте их с объемом дистиллированной стерильной воды, обработанной в автоклаве, до получения 1 литра среды. Автоклавируйте среду в неплотно закрытых бутылях или колбах в течение 25 минут. Дайте ему остыть примерно до 50 градусов Цельсия, прежде чем добавлять реагенты, которые разрушаются при высокой температуре, например, антибиотики или другие пищевые добавки.
Дайте автоклавированной среде остыть до 50 градусов по Цельсию и не ниже 45 градусов по Цельсию, так как агар застывает в контейнере до того, как его можно будет вылить. Возьмите стерильные чашки Петри и налейте столько, чтобы покрыть всю поверхность чашки и, по крайней мере, половину ее глубины. Избегайте переполнения чашек и, желательно, не допускайте контакта агара с верхним краем чашки. Дайте пластинам застыть в стерильной среде (например, под колпаком с ламинарным потоком), не закрывая крышки и оставив в углу колпака.
Просушите тарелки. Хотя чашки можно использовать сразу после их установки, на поверхности агара будет присутствовать некоторая влага, которая предотвратит достаточное прилипание колоний бактерий. Поэтому лучше всего высушить чашки перед нанесением каких-либо бактерий, например, оставив их на комнатная температура в течение нескольких дней или в течение получаса под вытяжкой с ламинарным потоком или при 37 градусах Цельсия инкубатор.
Храните тарелки. Высушенные тарелки следует складывать вверх дном (перевернуть) на крышки и возвращать в исходное состояние. упаковка, заклеенная лентой и либо завернутая в фольгу для защиты от света, либо в соответствующий контейнер. Всегда пишите дату приготовления на пластинах и не используйте, если пластинам более 2 месяцев.
Рекомендации
- «Современные протоколы молекулярной биологии»; Карен Эльбинг и Роджер Брент; 2002
Советы
- Выполняйте как можно больше из вышеперечисленных шагов (желательно все) в стерильной среде (например, под открытое пламя или вытяжной шкаф с ламинарным потоком), чтобы предотвратить попадание переносимых по воздуху бактериальных загрязнителей и их роста в СМИ.
об авторе
Палмер Оуён имеет степень магистра международного бизнеса Калифорнийского университета в Сан-Диего и степень магистра в области международного бизнеса. Бакалавр социологии Калифорнийского университета в Санта-Барбаре. биолог. Он был писателем-фрилансером с 2006 года. Помимо писательского мастерства, он является постоянным трейдером Форекс и интернет-маркетологом.
Фото Кредиты
Jupiterimages / Comstock / Getty Images