Гель-электрофорез - один из основных методов, используемых в молекулярной биологии для анализа ДНК. Этот метод включает миграцию фрагментов ДНК через гель, где они разделяются по размеру или форме. Однако даже такой научно обоснованный метод, как гель-электрофорез, не застрахован от ошибок.
Как работает электрофорез
•••Jezperklauzen / iStock / Getty Images
Гель-электрофорез включает использование геля, обычно сделанного из полимеров, таких как агароза. Гель погружают в буферный раствор, проводящий электрическое поле. Интересующий образец ДНК сначала фрагментируется с использованием рестрикционных ферментов, а затем вводится в гель. При включении электрического поля фрагменты ДНК в геле перемещаются к положительному электроду. Если фрагменты ДНК имеют разный размер, то время миграции будет различным для каждого размера фрагмента. Затем фрагменты визуализируются с помощью красителя или авторадиографии и видны в виде полос в геле.
Загрязнение образца
•••aiaikawa / iStock / Getty Images
Основное применение электрофореза - это инструмент для анализа ДНК в молекулярной биологии, но он также используется в судебной медицине как средство идентификации образцов с места преступления. Для получения точных результатов важно свести к минимуму источники ошибок в этой методике. Одним из источников ошибки является заражение образца ДНК. Если в образце присутствует чужеродная ДНК, в геле будет больше полос, чем в геле, содержащем только очищенный образец.
Проблемы с гелем, током и буфером
•••IndiaImages / iStock / Getty Images
Концентрация геля также должна быть правильной, чтобы избежать ошибок. Если концентрация слишком высокая или слишком низкая, фрагменты будут перемещаться либо слишком медленно, либо слишком быстро. Это приведет к ошибкам в разрешении различных диапазонов. Во время электрофореза необходимо следить за тем, чтобы напряжение было стабильным. Любые колебания напряжения приведут к неустойчивой миграции фрагментов ДНК, что приведет к ошибкам при считывании полос. Буферный раствор также должен иметь правильный состав, поскольку буфер с неправильным pH или ионной концентрацией изменит форму фрагментов ДНК, а также изменит время их миграции.
Правильная визуализация
•••Ingram Publishing / Ingram Publishing / Getty Images
Самое главное, гель нужно правильно визуализировать. Если концентрация красителя или радиоактивного зонда, используемого для визуализации образцов, слишком высока, результирующее изображение будет очень неаккуратным, поскольку также будут визуализированы остаточные фрагменты. Если концентрация геля слишком низкая, визуализации не будет. Если на всех этапах соблюдаются правильные процессы, гель-электрофорез даст точные результаты, которые можно использовать с большой уверенностью. Как и все научные процедуры, гель-электрофорез может быть подвержен ошибкам, но их можно свести к минимуму при правильной подготовке и обращении.
