Основные компоненты ВЭЖХ

Высокоэффективная жидкостная хроматография - это метод лабораторного анализа смеси. Это эффективный тип хроматографии, который использует высокое давление, а не просто силу тяжести, для продвижения образца смеси через колонку. Вводится проба, затем насос с высоким давлением помогает перемещать пробу вдоль насадочной колонны, где она разделяется на отдельные компоненты. Затем это разделение анализируется детектором для получения результатов.

Для введения в ВЭЖХ образец необходимо сначала растворить в полярном жидком растворителе, предпочтительно в растворителе с известными спектрами ВЭЖХ, чтобы его данные можно было отличить от данных образца. Жидкий раствор, содержащий образец, помещается в прибор и отправляется в колонку. Фактическое расположение места инъекции зависит от марки инструментов. В большинстве случаев процесс инъекции автоматизирован, но в некоторых случаях лабораторный работник должен ввести образец с помощью маленькой иглы шприца.

Компонент насоса ВЭЖХ необходим, потому что он обеспечивает давление, которое продвигает образец через колонку. Сила насоса может быть разной, но мощный насос может создавать давление до 6000 фунтов на квадратный дюйм, или фунтов на квадратный дюйм, которое применяется после впрыска образца. Это позволяет пробе проходить через колонку быстрее и эффективнее, чем если бы она протекала через колонку, используя только силу тяжести.

Повышенная скорость пробы, проходящей через колонку с помощью насоса, позволяет использовать другой тип колонки, чем те, которые используются в простой жидкостной хроматографии. Материал насадки в колонке может иметь гораздо меньший размер частиц, что увеличивает площадь поверхности и, следовательно, способствует взаимодействию образца с колонкой. Большинство колонок для ВЭЖХ работают с соблюдением полярности. Проба растворяется в полярном растворителе, а колонка состоит в основном из неполярных углеводородов. Полярные части молекулы образца очень быстро проходят через колонку, потому что они в первую очередь взаимодействуют с растворитель, тогда как неполярные компоненты образца задерживаются в колонке, образуя слабое взаимодействие с колонкой составные части. Следовательно, компоненты образца выходят из колонки в порядке от наиболее полярных до наиболее неполярных.

Детекторы также различаются в зависимости от типа используемого прибора для ВЭЖХ. Однако большинство из них работают одинаково. Источник ультрафиолетового света освещает отделенные компоненты образца, когда они выходят из колонки. Большинство органических соединений поглощают определенное количество света, поэтому, когда они проходят мимо направленного светового луча, детектор может определить, сколько света поглощается. Детектор также регистрирует время удерживания компонентов в зависимости от порядка их выхода из колонки. Затем этот выходной сигнал можно проанализировать на основе площади пика, чтобы определить точную природу компонентов образца.