Постройте график зависимости концентрации продукта от времени для данных из первой пробирки ферментативного анализа. Примечание: по горизонтальной оси должно быть указано «время», а по вертикальной оси - «концентрация продукта».
Вычислите линию линейной регрессии для точек данных, построенных в разделе 1, шаг 1. Хотя Excel и графические калькуляторы могут легко определить эту линейную модель, вы можете получить оценку регрессии. наклон линии путем деления разницы в концентрации продукта между соседними точками данных на их разницу во времени.
Запишите наклон линии линейной регрессии из раздела 1, шаг 2 как «начальная скорость реакции (Vo)». Примечание: в модели линии регрессии «[концентрация продукта] = m [время] + b» коэффициент «m» является склон.
Повторите шаги 1, 2 и 3 для остальных пробирок в анализе.
Постройте график, обратный концентрации субстрата для каждой пробирки, в зависимости от обратной скорости его начальной реакции (из раздела 1, шаг 4). Например, если начальная скорость для пробирки с начальной концентрацией субстрата 50 мкмоль (мкМ) составляла 80 мкМ / с, обратное значение - 1/50 мкМ для концентрации субстрата и 1/80 мкМ / с для начальной скорость. Примечание: обратная концентрация субстрата должна быть на горизонтальной оси, а обратная начальная скорость должна быть на вертикальной оси.
Примечание: концентрация субстрата должна быть на горизонтальной оси, а начальная скорость реакции должна быть на вертикальной оси.
Определите линию линейной регрессии для диаграммы, построенной в разделе 2, шаг 1. Примечание: поскольку вам нужно знать Y-пересечение линии регрессии, вы должны ввести точки из Раздел 2, шаг 1 в Excel или графическом калькуляторе и используйте встроенное регрессионное моделирование. функциональность.
Разделите 1 на точку y-пересечения с линией линейной регрессии. Это даст вам значение, обратное Vmax, максимальной скорости реакции для фермента. Примечание: если модель линейной регрессии принимает форму «[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + B», то значение «b» будет пересечением по оси Y. Разделите 1 на «b», чтобы вычислить значение, обратное Vmax.
Разделите 1 на результат из раздела 2, шаг 3, чтобы вычислить фактическое значение Vmax.
Определите концентрацию фермента в исходном анализе (см. Исходные данные). Примечание: концентрация фермента одинакова для всех пробирок; в анализе меняются только концентрации субстрата.
Разделите Vmax (из раздела 2, шаг 4) на концентрацию фермента (из раздела 2, шаг 5). Результат - значение Kcat.
Копирайтер из Чикаго, Энди Паскези имеет большой опыт написания статей для автомобильной (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), финансовых услуг (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), клиентов здравоохранения (Abbott) и потребительских товаров (Sony, Motorola, Knoll). Он получил степень бакалавра гуманитарных наук по английскому языку в Гарвардском университете, но не обращает внимания на оксфордскую запятую.