Electroforeza pe gel este o metodă utilizată în laboratoare pentru separare ADN (acidul dezoxiribonucleic). Poate fi folosit și pentru separarea ARN-ului și proteinelor.
Citirea rezultatelor electroforezei pe gel permite cercetătorilor să determine mărimea firelor dintr-o probă. Pentru a înțelege cum funcționează procesul, trebuie mai întâi să învățați definiția electroforezei pe gel.
Definiția electroforezei în gel
Electroforeza pe gel este un instrument puternic folosit în biologie moleculara pentru a determina dimensiunea și sarcina electrică a ADN-ului, ARN-ului și proteinelor. Începeți prin a folosi bucăți de ADN care au fost digerate de enzime dintr-un fir mai mare de ADN.
Folosind intensitatea benzii de electroforeză pe gel ca rezultate, vă puteți da seama care este dimensiunea fragmentelor. Se poate obține apoi un Amprenta ADN.
După cum dezvăluie porțiunea „electro” a cuvântului, a definiția electroforezei pe gel presupune utilizarea unui câmp electric. Se folosește o mașină specială care conține o soluție tampon care acoperă electrozii, o fântână pentru gelul care se suspendă în interior și electrozi singuri.
Gelul în electroforeza în gel
Electroforeză cu gel necesită utilizarea unui gel format într-o placă realizată de obicei dintr-o versiune purificată de agar din alge marine numită agaroză.
Geluri de agaroză realizează o matrice poroasă prin care moleculele încărcate de diferite dimensiuni pot călători cu viteze diferite. O soluție chimică numită bromură de etidiu (EtBr) este adăugată la soluția de gel înainte de a o turna într-o matriță.
Dacă aveți molecule ADN sau proteine foarte mici de separat, poate fi necesar să utilizați un gel de poliacrilamidă în loc de agaroză. Aveți grijă când utilizați poliacrilamidă, deoarece este neurotoxică.
Un pieptene special este plasat în matrița cu gel de agaroză și apoi îndepărtat cu atenție după ce se solidifică. Aici este plasat fragmentul de ADN sau alte probe moleculare, care au fost mai întâi amestecate cu un colorant special de încărcare. colorant de încărcare este doar pentru a urmări mișcarea ADN-ului, deoarece nu este vizibil altfel.
Există, de asemenea, o fântână care conține ceea ce se numește a Scara ADN sau marker. Acesta servește ca un șablon de înaltă calitate, cu dimensiuni de bandă cunoscute, pentru compararea dimensiunilor cu probele de ADN care sunt studiate. Odată ce câmpul electric este aplicat, aceste molecule încărcate negativ vor călători prin gel spre capătul pozitiv.
Rezultatele electroforezei pe gel
Odată ce moleculele au călătorit până la capătul gelului, este timpul pentru citire rezultatele electroforezei pe gel. Vopseaua EtBr din gel se leagă ușor de ADN, de unde se folosește și apoi puteți vedea benzi de fluorescență a ADN-ului sub lumina UV.
Trebuie să aveți mare grijă să nu atingeți bromura de etidiu, deoarece afinitatea sa pentru ADN înseamnă, de asemenea, că poate să o desfacă; de aceea este considerat un mutagen. Vopsele mai noi și mai sigure sunt acum disponibile, deși prețurile lor sunt mai mari.
Lumina UV dezvăluie intensitatea benzii de electroforeză în gel a ADN-ului sau a altor probe moleculare. Amplasarea benzilor pe un gel dezvăluie dimensiunea Fragment de ADN. intensitatea benzii de electroforeză pe gel relevă concentrația moleculei.
Acum puteți compara benzile de ADN din probele dvs. cu proba de scară ADN. Dimensiunile cunoscute ale benzii scării vă vor ajuta să determinați dimensiunea relativă a ADN-ului pe care îl studiați.
Importanța electroforezei pe gel de calitate
Electroforeza pe gel a fost utilizată în Amprentarea ADN și criminalistică. A ajutat cercetătorii să determine informații despre genomul multor specii. Utilizarea rezultatelor electroforezei pe gel de înaltă calitate sunt esențiale pentru aceste domenii importante.
Prin urmare, este crucial să lucrați cu ingrediente de înaltă calitate și să aveți mare grijă la fabricarea gelurilor. Este esențial să se prevină contaminarea probelor de ADN cu ARN sau proteine.
Asigurați-vă că utilizați un tampon curat, turnați gelul cu grijă, astfel încât fântânile pieptenei să fie formate uniform și să păstrați toți reactivii la temperatura adecvată. Electroforeză cu gel intensitatea benzii trebuie să fie vibrantă și curată, fără urme de alt ADN în fundal și fără pete de ARN sau proteine care să polueze gelul.