După ce ați prelevat probe de ADN pe un gel de agaroză și ați făcut o fotografie, puteți salva imaginea pentru mai târziu, moment în care puteți analiza rezultatele și le puteți interpreta. Tipurile de lucruri pe care le căutați vor depinde de natura experimentului dvs. Dacă faceți amprente ADN, de exemplu, veți dori să comparați dimensiunea bucăților de ADN din două mostre - de la suspect și probabil dintr-o probă de la locul crimei. În schimb, dacă lucrați cu plasmide provenite de la bacterii, prin contrast, este posibil să fie necesar să vă asigurați că plasmida conține inserția. În consecință, modul în care vă interpretați gelul va depinde în parte de experimentul pe care l-ați făcut. Cu toate acestea, există câteva reguli generale pe care le puteți aplica.
Rețineți că este posibil să trebuiască sau nu să utilizați instrucțiunile din această secțiune. Electroforeza pe gel de agaroză este adesea utilizată pentru a confirma că o plasmidă conține o inserție dată. Dacă nu lucrați cu plasmide, puteți sări peste această secțiune. Cu toate acestea, dacă sunteți, puteți urma aceste instrucțiuni.
Observați că, dacă lucrați cu plasmide netăiate sau tăiate, nu puteți estima dimensiunea folosind procedura din secțiunea 1 de mai sus. Acest lucru se datorează faptului că plasmidele netăiate și tăiate migrează la viteze diferite de ADN liniar.
Comparați numărul de benzi din fiecare bandă. Reamintim că o enzimă de restricție taie ADN-ul în locurile unde apare o secvență dată numită situs de restricție. Dacă o probă a fost tratată cu DOUĂ enzime de restricție, ar trebui să existe o bandă pentru inserție și o bandă pentru restul plasmidei. Acest lucru se datorează faptului că inserția va fi flancată de două situri de restricție, fiecare pentru o enzimă diferită, astfel încât tăieturile de la ambele site-uri vor elibera inserția de plasmidă. O tăietură la un singur sit, prin contrast, va converti plasmida în ADN liniar. O probă tăiată fără enzime de restricție sau o enzimă de restricție ar trebui să prezinte o singură bandă, în timp ce o probă tăiată cu două enzime de restricție ar trebui să prezinte două benzi.
Căutați benzi create de ADN plasmidic tăiat. O plasmidă tăiată are o tăietură într-o singură fire, deci migrează mai lent decât o plasmidă tăiată. La rândul lor, plasmidele tăiate migrează mai lent decât ADN-ul netăiat.
Estimează dimensiunea inserției folosind procedura descrisă în secțiunea 1 și determină dacă se potrivește așteptărilor tale (care vor varia în funcție de experiment).
Lucruri de care ai nevoie
- Creion
- Hârtie
- Program foaie de calcul
- Poza gelului tău
- Rigla