Calculul titrului pentru un virus este un mod complicat de a spune că un om de știință numără numărul de viruși dintr-un anumit eșantion. Pentru a calcula titrurile de virus, oamenii de știință infectează plăcile de bacterii în creștere cu soluții virale la concentrații diferite și descoperiți numărul de viruși din soluția originală numărând bacteriile care au murit din cauza virusului infecţie.
Puneți mănuși, umpleți 10 tuburi de cultură cu 9 ml de bulion și etichetați-le „10 ^ -1”, „10 ^ -2”, „10 ^ -3” și așa mai departe până la „10 ^ -10”. Aceste tuburi vor fi utilizate pentru diluții seriale virale utilizate pentru calcularea fagului titru. Deoarece virușii pot ajunge la concentrații incredibil de mari, trebuie să le diluați pentru a le număra în mod eficient. Fiecare tub reprezintă o diluție de zece ori a virusului.
Luați 1 ml din cultura amestecată din tubul dvs. etichetat „10 ^ -1” și transferați-l cu o nouă pipetă în tubul următor, etichetat „10 ^ -2”. Se amestecă și acest tub.
Continuați acest model pentru a crea o serie de diluție în serie. Veți ajunge cu 9 tuburi de 9 ml și 1 tub de 10 ml. Sarcinile virale din tuburile dvs. vor fi diluate oriunde de 10 ori (primul tub) sau de 100 de ori (cel de-al doilea tub) până la zece miliarde de ori (tubul final).
Adăugați două picături de cultură bacteriană în agar și amestecați-o ușor. Acestea sunt bacteriile care vor fi ucise, permițându-vă să numărați numărul de particule de virus dintr-o anumită soluție.
Adăugați 1 ml din fiecare diluție în serie în tubul său de agar corespunzător în timp ce tuburile sunt încă în baia de apă fierbinte. De exemplu, 1 ml de diluție serială de 10 ^ -1 ar trebui să intre în tubul de agar etichetat „10 ^ -1”.
Se amestecă fiecare tub și apoi se toarnă fiecare tub în placa Petri cu eticheta corespunzătoare. Acest lucru va crea un strat subțire de agar care a fost inoculat cu bacterii și viruși în fiecare placă. Lăsați plăcile să crească peste noapte într-un incubator.
Scoateți farfuriile din incubator și examinați-le. Ar trebui să vedeți zone tulbure pe toată placa în care bacteriile au crescut, cu excepția micilor pete clare numite plăci. Aceste plăci sunt pete de bacterii moarte și fiecare placă reprezintă un virus.
Luați numărul de plăci pe farfurie și înmulțiți cu 10. Dacă ați număra 157 de plăci, ați obține 1570.
Înmulțiți numărul obținut în pasul anterior cu inversul numărului de pe tubul de diluare. De exemplu, dacă placa pe care ați selectat-o este placa 10 ^ -5, veți înmulți 1570 cu 10 ^ 5 pentru a obține 157000000. Acest număr final este titrul fagului dvs. și reprezintă numărul de viruși pe ml din cultura dvs. originală.