Clonarea TA este o metodă simplă și convenabilă de subclonare a produselor cu reacție în lanț a polimerazei (PCR). „TA” este prescurtarea pentru „timină” și „adenină”. Această tehnică de clonare utilizează capacitatea timinei de a se hibridiza cu adenina în prezența ligazelor. Enzimele de restricție nu sunt utilizate, spre deosebire de metoda tradițională de subclonare. În schimb, produsele PCR sunt amplificate folosind enzime Taq polimeraze.
Metodă
Metoda de clonare TA utilizează activitatea transferază terminală a anumitor surplomburi de acid dezoxiribonucleic la fiecare capăt al produsului PCR.
Pentru a clona acest produs PCR într-un vector plasmidă se folosește un vector de clonare liniarizat cu trei surplomburi prime-T (3'-T) numite vector T. Produsul PCR este amestecat cu acest vector în proporție mare.
La amestec se adaugă ADN ligază (ligază T4), care permite celor două produse să se hibridizeze și să se unească.
Avantaje și dezavantaje
Clonarea TA este o metodă convenabilă de subclonare a produselor PCR în vectorul liniarizat și este mult mai simplă și mai rapidă decât metodele tradiționale de subclonare. Deoarece această metodă nu utilizează enzime de restricție, produsele fără situri de enzime de restricție pot fi clonate.
Un dezavantaj este că kiturile de clonare TA sunt foarte scumpe și, prin urmare, utilizarea lor este limitată. În plus, nu există clonare direcțională; deci probabilitatea clonării într-o direcție opusă este mai mare.
Kituri de clonare TA
Mai mulți producători vând truse de clonare TA. Unele sunt Invitrogen, QIAGEN și Premier Biosoft.
